离子注入选育a 一乙酰乳酸脱羧酶菌株.pdfVIP

维普资讯 2{}01年 6月 西北大学学报 (自然科学版) Jun 2001 第3l卷第 3期 JournalofNorthwestUniversity(NaturalScienceEdition) Vo1．3lNo．3 离子注入选育o一【乙酰乳酸脱羧酶菌株 惠友权 ，黄建新 ，孔锁 贤。 (1．西北大学 生命科学学院，陕西 西安 710069；2．宝鸡啤酒厂t陕西 虢镇 721300) 摘要 ：采用离子注入技术对一株产 a一乙酰乳酸脱羧酶 的地衣芽孢杆茼(BacillusLicheniformis) BI_391进行诱变处理 结果表咀，在N 注入荆量为5o×10”／era。时，诱变效果较好 。^L正变菌株中 反复筛选 ，得到一株产酶量 离的茼株HI115，比原 出发茼株的酶活提 高了40 左右。经过连续传代 实验 ．其遗传性状稳定 。 关 键 词 ：离子注入；a乙酰乳酸脱羧酶；地表芽孢杆茼 中图分类号 ：Q939．9 文献标识码：A 文章编号：1000—274x(2001)O30251-O4 a一乙酰乳酸脱羧酶 (aacetolactatedeearboxy 剂量注人、细胞损伤较轻的情况下发生．因而易获得 lase，简称 aAIDC)．可直接将啤酒 中的乙酰乳酸 较高的突变率和较宽的突变谱 ，更利于筛选适台特 (acetolactate)转化为乙偶姻 (acetion)，而不经过形 定 目的的突变型。据此 ，本实验采用离子注人法对野 成双乙酰 (diacety1)这一阶段 。这可太大缩短啤酒熟 生 菌株 BI391进行诱变 处理，以期 获得 高产 a— 化期 ．提高设备利用率 ，节省能源 ，降低生产成本 ．同 AIIX；的优 良菌株。 时改善了啤酒 的风味，因而具有一定的社会经济效 益 。在 自然界中，能产生a—AIDC的微生物相当多， 1 材料和方法 如：地衣芽孢杆 菌 (B．Lichenifo~nis)、短 芽孢杆菌 (B．brevis)、乙酰短杆菌 (Brevibacterigmacetylium) 1、1 菌 种 等。然而 ．野生菌的产酶量均很低 ，一般每毫升发酵 地衣芽孢杆菌 BI391．由本实验室提供。 液中约为 0．20ttmol／min，距 离工业化应 用还相 当 1．2 培养基 远 ，故需大幅度提高。 肉汤 固体培养基 (g／I)：牛 肉膏 50．蛋 白胨 离子注人技术作为一种新的生物诱变方法 ，是 10．0，NaCl5．0．pH 7．0～ 7．2，121．3C，灭 菌 2O 80年代 中期在我国发展起来 的．并已在农作物、微 m in 生物的诱变育种应用上取得了成效 。离子注人具有 摇瓶种子培养基 (g／l)：牛 肉膏 5．0，胰蛋 白胨 独特的诱变机理和生物效应 ，同常用的辐射诱变(如 20．0．葡萄糖 5．0，FeCI3·6HO 0．070，MnCI · X射线 ，一射线诱变及化学诱变)过程相 比．它除有 4H2O 0．010，MgSO4 ·7H2O 0．015，pH 6．5～ 7．0． 能量传递外 ，还有动量交换 、质量沉积 、电荷沉积等 110C．灭菌 30rain。 效应。将各种不同的离子注人细胞 ，通过 电、能、质的 摇瓶产酶培养基 (g／I)：牛 肉膏 5．0．蛋 白胨 共同作用，不仅可影响细胞的生理生化功能，还可使 50，柠檬 酸 5．0，葡萄糖 l0．0，(NH )SO 1．0， 细胞中的遗传物质发生改变。通过离子注人不仅能 K2HPO ‘·3H2O 5．0．ZnSO{·7H2O 0．050，MgSO 使细胞的外部形态、内部物质发生不 同程度的损伤，