实时逆转录聚合酶链反应绝对定量实验优化的研究.pdfVIP

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2017-09-01 发布于湖北
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实时逆转录聚合酶链反应绝对定量实验优化的研究.pdf

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上海医学检验杂志年第卷第期， · · $’ !% ( U@ED@EAV;839JTEHUIA$’ W;!%KS;(K ’)’ 4 文章编号：（）中图分类号：文献标识码： !!#$%$’(#’)’#) *% + 实时逆转录聚合酶链反应绝对定量实验优化的研究 ! 蔡刚，李闻捷，沈茜（上海长海医院实验诊断科，上海） $)’’ 摘要：目的探讨优化实验反应条件，使实时逆转录聚合酶链反应（）绝对定量能获得准确可靠的 # ,-#./, 结果。方法建立质粒标准品作为外参照；以管家基因0+.12 作为内参照，并对 3 $5、引物与探针比例、 4 等进行优化。结果优化条件后，反应的扩增效率接近了理论最佳值，并可使靶基因与管家基因 67889: ,-#./, 扩增效率保持一致，保证了方法的稳定性和可靠性。结论为了获得可靠、重复性好的实时,-#./,绝对定量结果，应对实验方法进行优化。关键词：实时逆转录聚合酶链反应；绝对定量；优化 # $%%’%( *++* -./*0+.12$3 2*($%-%5*$%.(.-/3*1!$%3/363/+3$/*(+5/%$%.( .13/*+357*%(/3*5$%.( !# # ) , 4 # # , ，，，，， $% (#)*,* -./0 1,%23*%567*68 (%:85%685 3,%8, !=%=%,.8,6% -=%=%,$)’’ ’ + 4 9 ; ’ ’ 4 ’ !=,% ： 80+$/*5$ 035$%63 -;9;:9?@9;?ABACAD :9E#?AB9,-#./,FF?9B 8;:;H?EADAD EII7:E?9EDJ:9:;J7IAH9 9 = = 4 G 4 = 99:AB9D?EJE?EK:3$7.;+ -@9E :;EI@LEFHEF9J;DI:9E?AD ?@9EHF;7?9 7ED?A8AIE?A;DEFFE H 7FAD EFBAJEF = == 4 M G G 4= 9?9:DEF?EDJE:JEDJ@;7F9#N99AD 9D90+.12EFAD?9:DE:989:9DI9EDJ;?ABACAD ?@9EFFE H F99I?AD ?@93 $5 = 44 = 4 G G 4 4 ，， I;DI9D?:E?A;D ?@9:E?A;;8 :AB9?; :;H9 EDJ?@9H7889:K3+21$+ -@9EB A8AIE?A;D988AIA9DIA9FL9:9AJ9EAD?@AF