小麦TaMvb2-Ⅱ基因的克隆.pdfVIP

J．SHANXIAGRIC．UNIV．(Nat“ral。SfinfPEditi0，) 嘲 l学报(自然科学版)2O09．29(2 002485 小麦 TaMvb2一Ⅱ基因的克隆 王爱萍 ，梁素明 ，宋长水。，董琦 ，杨武德 (1．山西农业大学 农学院，山西 太谷 030801；2．山西农科 院 遗传研究所 ，山西 太原 030031； 3．山西省农业技术推广站 ，山西太原 030002) 摘 要 ：为了研 究小麦转录因子基因 TaMyb2一Ⅱ的功能 ，利用 SalI和 SacI双酶切的方法 ，构建 了基 因克隆及表 达载体 PEBV，获得 了正义PEBV一35Sp—TaMyb2一Ⅱ一NOSter阳性克隆，实现 了TaMyb2一Ⅱ基 因的定 向克隆。 关键词 ：小麦；TaMyb2一Ⅱ；克隆 中图分类号 ：$512 文献标识码 ：A 文章编号 ：1671—8151(2009)02—0104—02 CloneingofWheatTaMyb2-lIGene W ANG Ai—ping。，LIANG Su—ming ，SONG Chang—shui。，eta1． (1．CollegeofAgriculture，ShanxiAgriculturalUniversity，TaiguShanxi030801，China；2．ShanxiInstituteof Crop Genetics Taiyuan Shanxi030031，China； 3．ShanxiAgricutural Technology Extension Station． Taiyuan Shanx 030002，China) Abstract：InordertOanalysethefunctionofwheatTaMyb2一Ⅱgene，cloneandexpressionvectorPEBVwasconstruc— tedandsensePEBV-35Sp-TaMyb2一NOSterpositiveclonewasobtainedbySalIandSacIdoubledigests．Thusthe TaMyb2一I1wasdirectionalcloned． Keywords：Wheat；TaMyb2一lI；Clone 转录基因编码的转录因子是参与基 因转录水 tor均购 白天更生物技术有限公司。 平调控过程的重要反式调控元件 ，通过调节生长发 1．2 引物设计 育过程中外部形态和生理变化发挥重要作用_l]。 在 TaMyb2一Ⅱ全长 RT-PCR 引物 的 5端分 拟南芥 中有 1500个转录基 因[5]，Myb是转录因子 别加上 SalI和 SacI限制酶位点，另在限制酶酶 中最大的家族。 目前 ，对一部分 Myb家族成员进 切位点外侧加 2个保护碱基，如下 ： 行 了克隆且研究了他们 的功能，但小麦 Myb家族 P2F： 5一GCGAGCTCATGGGGAGGGCTC— 成 员 的克 隆 只有几个 ，尤 其是本研 究得 到 的 CGT一3 TaMyb2一II的克隆尚未见报道 。鉴于 TaMyb2转 P2R：5一GCGTCGACCTAGTGATGGTGA— 录因子的重要性 ，本文进行 TaMyb2一Ⅱ基因的克 TGGTGATGAATCTGCGGTAAGTCTA一3 隆，以期研究 TaMyb2一Ⅱ基因的功能。 1．3 质粒的双酶切 ①以cDNA为模板 ，用 引物 P31进行 PCR 1 材料与方法 扩增 ，回收的PCR产物与 pBS-TVector连接转 1．1 材料