多发性脑梗塞性痴呆的模型建立及评价.pdf

中文摘要 多发性脑梗塞性痴呆的模型建立及评价 摘 要 目的：建立一种有机微血栓所导致的多发性脑梗塞性痴 呆动物模型，模拟临床上多发性脑梗塞性痴呆病的发生。采 用Moms水迷宫的方法观察多发性脑梗塞性痴呆大鼠行为学 变化，应用光镜观察多发性脑梗塞性痴呆大鼠海马的形态学 改变，评价本模型的可靠性和实用性。为探讨多发性脑梗塞 性痴呆的发病机理、临床治疗、筛选新药等奠定初步的实验 及理论基础。 只)：手术方法同模型组，不同之处是向颈内动脉内注入生 用10％水合氯醛(35m∥lOOg)腹腔内注射麻醉，无菌手术。 选择大鼠左侧为实验侧，于左侧颈外动脉逆行插管至左侧颈 总动脉的分叉处后，注入栓子混悬液(有机微血栓)O．5ml， 推注同时开放夹闭的颈总动脉，并在不少于30秒的时间内 缓慢注入，使栓子通过颈内动脉进入颅内至大脑各动脉，造 成多发性脑梗塞动物模型。有机微血栓的制备：取正常人血 浆(含血小板)Iml加入凝血酶500单位，凝固后置于生理 盐水中反复漂洗后，用超声波细胞粉碎机将其打碎。在显微 镜下用测微尺测量栓子大小，使栓子直径多在20—40微米 之间，再用生理盐水将其配成lOmg／ml的栓子混悬液。制作 栓子整个过程中必须保证无菌。 中文摘要 假手术组和模型组于术后第8天与正常对照组Wistar大鼠开 始进行行为学测试，采用Morris水迷宫实验检测大鼠的空间 学习记忆能力，主要通过检测定位航行实验(Placenavigation test)及空间探索实验(Spatialprobetest)来观察多发性脑梗塞 性痴呆大鼠行为学变化。 组织切片的制备：正常对照组5只，假手术组5只，模 型组痴呆大鼠10只，用以形态学方法观察。行为学测试完 腔，经升主动脉插管，先用温生理盐水100ml冲洗血管，继 固定，持续2小时后，开颅取脑，取脑组织浸入4％多聚甲 脚问窝之间一段脑组织(海马所在部位)，应用振荡切片机 作连续冠状切片(片厚30微米)，分别裱片于涂有蛋白甘油 的载物片上，放入恒温箱烘干，将这些连续冠状切片按编号 的单、双数分成两套，然后分别进行尼氏(Nissl)染色和 HE染色，分色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封 片。光镜下观察海马细胞构筑的形态学变化。 结果：l、行为学测试结果：实验中发现，术后早期观 察模型组大鼠运动减少，术后第8天已基本恢复，无明显的 运动障碍。所有大鼠游泳姿势无异常并在池中积极探索。模 型组的学习成绩较正常对照组和假手术组明显下降。在空问 探索实验中观察，正常对照组和假手术组大鼠在90秒内穿 过原安全平台位置的次数和在原安全平台象限即NE象限探 而模型组与正常对照组和假手术组均有显著性差异(P 中文摘要 0．01)。定位航行实验中所有大鼠逃逸潜伏期均随训练次数增 加而下降，三组大鼠均随训练天数的增加而学习记忆成绩增 加(时间缩短)，但模型组每天学习记忆成绩比正常对照组和 假手术组差。 2、形态学观察结果：HE染色：模型组左侧脑组织多部位可 见局部缺血性改变，神经细胞胞体不同程度缩小，胞浆尼氏 体减少或消失，核固缩，核碎裂，核溶解，可见失去正常结 构的红色神经元和格子细胞。梗塞灶中可见巨噬细胞，胶质 细胞增生，胞浆均匀呈嗜伊红改变，胞核结构不清，染色加 深；在多部位部分小血管腔内可见栓子，大多呈海蛇头状， 有的呈丝絮状物。正常对照组和假手术组及模型组正常对照 侧无上述病理改变。Nissl染色：低倍镜下，正常对照组和假 手术组及模型组正常对照侧海马各层细胞排列紧密，层次分 明，细胞核及尼氏体均无任何改变。模型组实验侧海马CAl、 CA2、CA3、垂直部、齿状回等梗塞区可见细胞排列稀疏， 有明显的细胞脱失，大量的胶质细胞增生。高倍镜下，正常 对照组和假手术组及模型组正常对照侧各层细胞核膜完整， 胞浆内尼氏体清晰可见。模型组实验侧海马CAl、CA2、CA3、 垂直部、齿状回梗塞区形态正常的细胞数明显减少，许多细 胞结构变的不完整，核固缩，胞浆内尼氏体溶解，甚至消失。 在观察海马的形态学变化时还发现有的痴呆大鼠在海马的 不同区同时出现细胞排列稀疏，有明显的细胞脱失，大量的 胶质细胞增生。从实验结果看出，所切片观察的10只痴呆 大鼠在海马上有8只出现上述病理改变，出现率为80％。正 常对照组和假手术组及模型组正常对照侧无上述病