磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶单克隆抗体的制备和鉴定.pdfVIP

维普资讯 云南大学学报 (自然科学版 )，2007，29 (6)：638—645 CN 53—1045／N 0258—7971 JournalofYunnanUniversity 磺胺 甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶 单克隆抗体的制备和鉴定 吕 琦，王泽华，邓双胜，马 岚 (云南大学 单克隆抗体工程技术中心，云南 昆明 650091) 摘要 ：为建立磺胺类药物残留的免疫化学分析方法 ，利用磺胺甲基嘧啶(SM)、磺胺二甲基嘧啶(SM2)分子 结构中的芳香氨基，采用重氮反应和戊二醛法将其与载体蛋白(牛血清白蛋白和鸡卵清蛋白)交联制备抗原，最 终获得5株抗SM和 18株抗SM2杂交瘤细胞株．对杂交瘤细胞株的核型、抗体的亚类和轻链型、抗体的异相 包被 ELISA反应性以及抗体的竞争反应性和交叉反应性进行了分析和评价．其中SM抗体 11C8结合SM的竞 争抑制质量浓度 IC50为 14．1 L，与类似物sD的交叉反应性接近20％，但与其他类似物低于10％．SM2抗 体中的6株抗体的竞争抑制质量浓度IC50在38．8—70．0 L范围内，2B7，4D5，13C9，14C5和 16C2抗体与 类似物SM的交叉反应性达到73．5％ 132．9％，而 15D10抗体与SM的交叉反应性低于5％ 因此，本研究所 获得的磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶抗体，可用于SM和SM2残留的免疫分析方法研究和应用． 关键词：磺胺甲基嘧啶；磺胺二甲基嘧啶；单克隆抗体 ；磺胺类 中图分类号：Q813．2 文献标识码：A 文章编号：0258—7971(2007)06—0638—08 磺胺类 (Sulfonamides，SA)药物是一类抑制核 为0．1mg／kg，其 中磺胺二 甲基嘧啶为 0．025 mg／kg[21 酸合成的人工合成抗菌药，属于广谱抗菌药物，具 ． 有毒性小、口服易吸收等特点，对许多革兰氏阳性 分析磺胺类药物残留的方法有很多种，目前比 菌和某些革兰氏阴性菌都有抑菌作用．磺胺类药物 较流行 的主要有高效液相色谱法 (HPLC)_3j、 种类繁多，但都含有抗菌功效结构——对氨基苯磺 液相一串联质谱法 (LC／MS／MS)_4j、放 射 免 疫 酰胺．由于磺胺类药物的价格低廉及其有效的抑菌 法 55_、酶联免疫检测法 (ELISA) 、胶体金免疫 作用，作为预防与治疗用药被广泛用于畜牧养殖业 层析法 ¨8J等．尤其是免疫分析方法具有操作简便、 中．但对磺胺类药物的不合理使用甚至滥用，一方 快速、特异性强等特点，近些年受到广泛关注，对兽 面会引起耐药菌株的出现，导致对动物性食品的污 药残留的检测提供了新的研究手段和技术．本研究 染和人类健康的威胁；另一方面会引起动物性食品 对磺胺类药物中的磺胺 甲基嘧啶(SM)和磺胺二甲 中磺胺类药物的残留，磺胺类药物会破坏机体正常 基嘧啶(SM2)，采用杂交瘤技术分别制备和鉴定了 菌群生态平衡、引发过敏性反应和尿及造血紊乱 特异性较强的抗 SM和SM2单克隆抗体． 等，且有致肿瘤的潜在危害．据报道，磺胺二甲基嘧 1 材料与方法 啶可诱发啮齿类动物 甲状腺增生或肿瘤 ¨1．因此， 磺胺类药物的残留检狈4备受关注 ．我国和美国以及 1．1 材料 欧盟等均将磺胺类药物列为动物饲养过程中限制 1．1．1 细胞株和实验动物 NS一1鼠骨髓瘤细胞 使用的药物，单个磺胺或总磺胺类的最高残留限量 由云南大学单克隆抗体工程技术中心保种；雌性