蛋白质组学样品处理方法的研究进展.pdfVIP

一78一 卅瞒·籀臌 蛋白质组学样品处理方法研究进展 卢国栋，张克山，刘永杰，尚佑军，郭建宏，郑海学，田宏，刘湘涛 (中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室 农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室，甘肃兰州 730046) 摘要：蛋白质组学研究已经成为后基因组时代的研究热点，是生命科学研究领域又一个新的突破口。以双向凝胶电泳为主 的蛋白质分离技术以及基于生物质谱的蛋白质鉴定技术是目前该领域主要研究技术手段。在双向凝胶电泳蛋白分离和蛋白质谱 鉴定中，样品处理影响甚至决定着蛋白分离效果和鉴定结果。因此有效的样品处理技术是获得真实、可靠实验数据的关键，在比 较蛋白质组学研究中样品处理尤为重要。本文针对双向电泳前的蛋白质样品处理及质谱鉴定前的样品处理技术的研究进展作以 综述． ． 关键词：蛋白质组学；样品处理技术；研究进展 中图分类号：0789文献标识码：B 文章编号：1005—944X(2011)06—0078--04 1994年澳大利亚学者Wilkins和Williams等处理等方面综述了蛋白质样品的一般处理方法。 人【l】提出了蛋白质组(Proteome)的概念，随后蛋白1 双向凝胶电泳蛋白质样品处理 质组学囝应运而生且应用广泛。蛋白质组学研究对象 双向凝胶电泳技术伴随着蛋白质组学的起始和 包括动物、植物和微生物，样品的来源广泛且复杂。 发展，样品处理是否得当直接影响双向电泳的效果网。 蛋白质的表达具有时间和空间的特异性，蛋白质数量 样品处理的目的是破坏蛋白质与其他生物大分子之 可能是其基因数量的数十倍甚至百倍以上脚。所以对 间的相互作用产生独立的多肽链，提高样品的溶解 蛋白质的分析将是后基因组时代面临的巨大挑战【4】。 度，保持蛋白质样品在整个电泳过程中的溶解状态， 1975年O’Farrel等网建立的双向凝胶电泳技术和80防止蛋白质的人为修饰。此外，蛋白质样品处理过程 年代末JohnB．Fennt司和KoichiTanakam发明的质中去除了蛋白酶、核酸、糖类、脂类和盐类等非蛋白质 谱分析方法极大的推动了蛋白质组学的发展，已成为 杂质，减少了对后期蛋白质的分离、显色和质谱鉴定 目前该领域主要的研究技术手段。但双向凝胶电泳 产生的影响。 分析和质谱鉴定对样品的溶解度、纯度和浓度等要求 1．1不溶性蛋白质的处理 较高，简单处理的蛋白质样品无法满足需要。为了达 天然状态的蛋白质溶解度一般较低，蛋白质的增 到有效的蛋白质分离、显色和鉴定，蛋白质的前处理 溶作用影响着最终结果并且决定着整个实验成败。由 至关重要。本文从对疏水性强的蛋白质嘲、极性蛋白 于蛋白质的异原性和非蛋白类杂质的影响，使所有的 质、高丰度蛋白的处理、低丰度蛋白的富集和对样品 蛋白质同时溶解仍具有很大的挑战性。对于不同样 溶液中干扰性物质的去除以及对不同染色后质谱前 品，需要摸索与之最相适应的处理手段。目前增加蛋 Journalofthe 积极尽快推进我国BSE风险等级的国际认证，有效 【J】，Official European 防范BSE的传入，同时也为将来应对欧盟成员、美国 147．187． TSE 【5】EC．The final【z】．Brussels： 等与我国牛肉贸易谈判提供依据。 Roadmap，COM(2005)322 参考文献： Belgium，2005．