人肝癌细胞系BEL-7404 和正常肝细胞系L-02表达蛋白质组双向凝胶电泳分析.pdfVIP

第45 卷 第2 期 2000 年 1 月 简 报 人肝癌细胞系BEL-7404 和正常肝细胞系L-02 表达的蛋白质组双向凝胶电泳分析 俞利荣 王 楠 吴高德 徐永华 夏其昌 * 中国科学院上海生物化学研究所 上海 200031; 中国科学院上海细胞生物学研究所 上海 200031. * 联系人 摘要 蛋白质组分析技术已在生物科学各领域被广泛应用 也是功能基因组研究的重要组成部 分. 通过对人BEL-7404 肝癌细胞系和 L-02 正常肝细胞系表达的蛋白质组 IPG-DALT 双向凝胶 电泳和图象分析 发现 7 个蛋白点只在肝癌细胞中检测到表达 14 个点只在肝细胞中检测到表 达 78 个蛋白点在两种细胞中表达量上有显著变化 P0.01 . 两种细胞蛋白质组表达反映在差 异表达谱上. 双向电泳重复性分析表明 IEF 方向平均位置偏差为 0.73 mm, SDS方向为 0.44mm 量的变异为 17.6%~19.2%. 双向电泳的重复性已适合于蛋白质组差异表达的研究 蛋 白质组差异表达谱可成为疾病诊断 药物作用分析和生命过程等研究的有用工具. 关键词 蛋白质组 双向凝胶电泳 差异表达谱 人肝癌细胞 肝细胞 蛋白质组 (Proteome)这一概念由澳大利亚Macquarie 大学的Wilkins 和Williams 于1994 年提出 并于 1995 年 7 月首次在 电泳 杂志上发表 指的是由一个基因组表达的全部蛋 [1] 白质 . 一门崭新而充满活力的学科 蛋白质组学 Proteomics 由此而诞生. 蛋白质组学 是在细胞整体水平上研究蛋白质的属性 表达水平 翻译后修饰 相互作用等 并由此在 [2] 蛋白质水平上获得对疾病过程 细胞生理生化过程和调控网络的广泛而完整的认识 . 它的 形成和发展与两大重要支撑技术 蛋白质双向凝胶电泳(Two-dimensional gel electrophoresis) 和质谱技术(Mass spectrometry) 的发展密切相关 同时又受生物信息技术发展而推动. 除了大 量双向电泳数据库和蛋白质组数据库建立外 蛋白质组研究的技术和方法已在细胞生长发育 调节和应急反应 蛋白质磷酸化和糖基化调节 蛋白质功能研究 疾病诊断的分子标记 以 及药物开发研究等诸多领域被广泛应用[3~8] 并成为功能基因组研究的重要组成部分. 蛋白质 组中全部蛋白质研究的复杂性已为人们所共识 这不仅是蛋白质组研究本身需要分辨细胞内 成千上万种蛋白质 并且对双向电泳的重复性和蛋白质微量分析鉴定技术提出较高的要求. 以 固相pH 梯度(Immobilized pH gradients)胶为第一向的双向凝胶电泳较大程度上提高了电泳的 重复性 国际上不同实验室间的电泳图谱表明分离的蛋白点位置具有较好的重复性 但蛋白 [9] 点的匹配率和量的重复性不尽如人意 . 此外 蛋白质超微量分析技术仍在继续发展和提高. 肝癌是威胁人类健康的重大疾病之一 它的发生和发展是一个多步骤 多因子控制的十分复 杂的过程 以往的研究多数集中于单个或少数几个基因和蛋白质 采用蛋白质组分析技术从 细胞整体水平上探讨这类多基因 多蛋白参与的疾病生化过程具有非常重要的实际和理论意 义. 国际上对肝癌细胞和组织的双向电泳多数集中于模式动物 如大鼠 为研究对象[10] 瑞 士日内瓦大学医院的 SWISS-2DPAGE 数据库含有人肝脏组织 HEPG2 肝癌细胞及其分泌蛋