慢性应激抑郁症大鼠海马中c-jun的表达.pdfVIP

2．主要试剂兔抗大鼠c-jtm多克隆抗体，生物素标记的山羊抗兔IgG， Morph／ 4G型药理生理实验多用仪(安徽蚌埠医学院无线电二厂)；Meta Cool Snaph／Ax70计算机图像分析系统。 二、实验方法 1．动物分组 验)测定其行为。然后随机分为急性应激组(A组)和抑郁模型组(c组)， 每组各18只。两组大鼠在体重和旷场行为分析中各指标均元显著差异。 2．应激过程 急性应激组(A组)试验第1ql天不给与任何刺激，笼养，每笼6只。 慢性应激组(c组)大鼠单笼喂养，每笼1只。试验第1—2l天内接受7种 不同的刺激：电击足底、冰水游泳、摇晃、热应激、夹尾、禁水、禁食。每天给 与一种刺激，各种刺激累计使用2—3次。第21天末，两组大鼠再次进行 3．灌流取材与切片 同时间各随机选取3只，用戊巴比妥钠行腹腔麻醉后，经左心室快速注入 脑，修块，后固定48小时以上，梯度乙醇脱水，石蜡包理后，行冠状切片。 4．JUN蛋白免疫组化检测 采用ABC免疫组化法检测片中的JUN蛋白。 5．图像分析 每只大鼠选取海马切片2张，在计算机图像分析系统上分别测量双侧 目标灰度值(GO)。 6．统计学处理 采用SPSSll．0统计软件对数据进行分析。 实验结果 一、开场行为和体重的评定 ·2· 实验前两组大鼠的体重、中央格停留时间、水平运动、垂直运动、修饰次 数、粪便粒数等方面均无差异(PO．05)。通过21天的慢性不可预见中等 强度的应激后，与对照组A相比，应激抑郁模型组大鼠中央格停留时间延 长，水平穿越格数减少，竖立次数减少，修饰次数减少，粪便粒数增多，体重 减轻(P0．01—0．05)． 二、光镜下海马神经元 光镜下观察，JUN蛋白免疫反应物质呈棕黄色颗粒状，位于细胞核内， 表达，但以cA3区和DG内染色最强。光镜下观察，A组大鼠海马CA3区 锥体细胞和DG颗粒细胞排列整齐、密集。而C组大鼠CA3区锥体细胞排 列稀疏，细胞有的呈长圆形或梭形，数量有所减少，细胞间隙增大；DG颗粒 细胞数量减少。 三、海马中JUN蛋白的表达 在DG，与0rain相比，1h、3h、5h面积比增加(1h、3h、5hP0．01)，3h达高 峰；灰度值3h、5h、8b均显著降低(P0．01)波谷出现在3h。 著差异，无明显表达高峰。②在DG，与oInjn相比，1h、3h面积比明显增加 (P0．01)，峰值出现在3h；各检测时点的灰度值与OⅡlin相比差异不显著， 未出现明显表达高峰。 3h、5 在0min、1h、3h、5h、8h均明显增加(PO．01)。 讨 论 本实验综合了应激和分养两种经典的抑郁模型，经过了2l天慢性不可 ·3· 预见性应激事件和分养的大鼠，水平运动(水平穿越格数)减少反映了动物 的活动度的降低，垂直运动(后肢直立次数)减少和中央格停留时间延长反 映了动物对新鲜环境的好奇程度降低，修饰次数减少反映了动物对周围环 境的要求和自身关注下降。由此可见，模型抑郁动物表现出的抑郁状态、活 动能力下降、兴趣丧失与抑郁症的临床表现中的精神运动性抑制症状极为 相似，模型的制作是成功的。应激因子的多变性和不可预测性是模型成功 的关键。 即刻早基因(IEG)是原癌基因中的一组，有近百个成员，与心理应激脑 为深入。FOS和Jun蛋白的主要分子结构极为相似，都含有一个高度保守 的亮氨酸拉链结构区．一个碱性氨基酸区和一个反式激活活动域(TAD)。 Jun蛋白经过广泛的修饰加工后进入细胞核内，形成异源二聚体FOS：Jun 合位点相结合，影响靶基因的表达。IEG偶联细胞外信息和细胞内靶基因 的转录，是许多基因的复制调节因子，参与体内许多生理病理过程。因此有 人把IEG称为“第三信使”。 一般情况下，中枢神经系统某些部位的神经细胞可有c—los、c-jun低 水平的表达。诱导lEG表达的并不只是某一特定因素，任何刺激达只要到 ～般认为具有普遍性，但另一方面又表现自身的特异性，