锯缘青蟹一种球状病毒的分离和组织病理观察.pdfVIP

维普资讯 第46卷 第 6期 厦门大学学报(自然科学版) Vo1．46 No．6 2007年 11月 JournalofXiamenUniversity (NaturalScience) Nov．2007 · 研究简报 · 锯缘青蟹一种球状病毒的分离和组织病理观察 邹 清，秦 骥 ，朱小明 (厦 门大学海洋与环境学院海洋学系，福建 厦门361005) 摘要 ：从患病锯缘青蟹组织中分离出一种无囊膜球状病毒，直径50~60nm．通过病理切片观察，病蟹肝胰腺、肌肉、心 脏、肠和鳃等多处组织器官受到感染，该病毒分布在细胞浆中，呈晶格状排列，不形成包涵体；这种病毒会导致细胞瓦解， 细胞核肿大变形，核质聚缩，核膜破损，肌丝断裂，线粒体坏死等症状． 关键词：锯缘青蟹；球状病毒；组织病理 中图分类号 ：S945 文献标识码：A 文章编号 ：0438—0479(2007)06．0884—05 有关蟹类病毒，国外已有较多报道，发现引起蟹类 理盐水稍微清洗后投入Bouiffs液中固定 18~20h，然 疾病的有 白斑综合征病毒 (WSSV)[1]，细小病毒样病 后按照常规方法制成6～8tLm厚度的切片 ，经 H—E染 毒(Parvo—likevirus)[，轮状病毒 (Rotavirus)[。]等；国 色后于Leica光学显微镜下观察拍照；解剖健康青蟹 内研究主要集 中于中华绒螯蟹 (Eriocheirsinensis)， 按照同样方法制作组织切片作为对照． 已报道有呼肠孤病毒样病毒 (Reovirus)[4]和小核糖核 1．3 超薄切片制作 酸病毒(Picornavirus)[5]均可引起 “颤抖症”．针对锯缘 解剖方法同上 ，所取组织剪成约 0．1cm×0．1em 青蟹(Scyllaserrata)病毒病 的报道还不多． ×0．2cm 的小块 ，投入 4℃预冷的2．5 戊二醛 0．1 锯缘青蟹是一种优 良的养殖品种，具有很高的商 mol／L磷酸缓冲溶液中固定 3～4h，用 0．1mol／L磷 品价值，在中国已有 100多年的养殖历史．近年来，随 酸缓冲溶液反复漂洗 ，然后按常规方法经 1％锇酸、酒 着养殖规模的扩大，养殖环境的不断恶化，各种疾病频 精、丙酮等处理，再进行环氧树脂包埋，切片经醋酸双 繁出现，自2O04年 11月以来，我国东南沿海各省青蟹 氧铀一柠檬酸铅双重染色后，用JEM2100透射电镜观 养殖区相继爆发大规模流行病 ，在成蟹养殖、膏蟹育肥 察拍照． 以及人工育苗过程中，都引起大批迅速死亡，采用各种 1-4 病毒分离 抗生素均无效果，已造成严重损失，而致病原因尚不清 病蟹样品解冻后，解剖出内部组织，剪碎后加入约 楚．我们于2006年5月在漳州龙海和厦门同安两地青 两倍体积 TE缓冲液 (Tris—HC10．05mol／L，EDTA 蟹养殖场所取到的病蟹样品中分离到一种球状病毒粒 0．001mol／L，PH7．4)，再加入 PSMF至 0．001mol／ 子，并进行组织病理观察，现将结果初步报道如下，以 L，冰水浴中匀浆 ，制成悬液 ，以3000r／min4C离心 期引起重视． 20rain，取上清液，沉淀加入等体积 TE缓冲液重悬， 再次离心后收集上清液，重复 2～3次后合并上清液， 1 材料和方法 然后加入等体积三氯 甲烷，充分混匀放置 2h，5000 1．1 实验动物