抗菌肽CM与haFGF改构体融合基因的构建与表达.pdfVIP

吉林农业大学学报 2009，31(4)：402～406，415 http：／／xuebao． 0“．edu．cn JournalofJilinAgriculturalUniversity E-mail：flndxb@vip．sina．corn 抗茵肽 CM 与 haFGF改构体融合基因的构建 与表达 ’ 解佳森 ，肖业臣2，秦玉侠2，王会岩2，张继威 ，李校垄 1．吉林农业大学生命科学学院，长春 130118；2．生物反应器与药物开发教育部工程研究中心， 长春 1301l8；3．吉林农业大学中药材 学院，长春 130118 摘 要：构建重组改构体aFGF2 和抗菌肽 CM基因的融合基因，使其在大肠杆菌系统中融合表达，以期获得 具有靶 向FGFR高表达肿瘤细胞 的抗肿瘤融合蛋 白。利用 PCR 引物延伸 的方法拼接得到带有 GdS铰链 的天 蚕素一蜂毒素杂合肽CM与aFGF28一l的融合基 因，插入大肠杆菌表达载体 pET20b中，构建表达质粒 pET-CM— aFGF254，并转化至大肠杆菌BL21(DE3)，氨苄青霉素抗性筛选重组转化子。IPTG诱导4h后，菌液经超声破 碎 ，以包涵体形式表达 的融合蛋 白约 占菌体总蛋 白的 18％。将包涵体溶解并通过差遮离心除去部分杂蛋 白， 透析复性并用 HeparinSepharoseCL．6B亲和层析 ，目的蛋 白得到初步纯化，为进一步研 究蛋 白的生物学活性奠 定了基础。 关键词 ：天蚕素一蜂毒素杂合肽 CM；人酸性成纤维细胞生长 因子改构体 aFGF2R_1 融合基 因 中图分类号 ：Q786 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—5684(2009)o4．o4O2一O5 ConstructionandExpressionofFusionGeneofAntibacterialPeptideCM andM odifiedhaFGF XlEJia—sen ，XIAO Ye—chen ，QIN Yu—xia ，W ANGHui—yan ，ZHANG Ji—wei。，LIXiao．kun 1．CollegeofL Science，JilinAgriculturalUniversity，Changchun130118，China；2．MinistryofEdu— cation，EngineeringResearchCenterofBioreactorandPharmaceuticalDevelopment，Changehun130118， China；3．CollegeofChineseMedicinalMaterials，JilinAgriculturalUniversity，Changchun130118， China Abstract：ThefusiongeneofmodifiedaFGF28l54andantibacterialpeptideCM wasrecombinatedandex— 一 pressed intheE．colisystem SOastoobtainfusionproteintargetingtumourcellswhichhavehighexpres— sionofFGFR ．Firstly，thegeneofCecropinAl7，melittin5 一 一 I2andaFGF28l54wasconnectedwithG4S