新城疫病毒JZ05株F基因重组pGAPZα的构建.pdfVIP

第 48卷第 11期 湖 北 农 业 科 学 Vo1．48No．11 2009年 11月 HubeiAgriculturalSciences Nov．，2009 新城疫病毒JZ05株 基因重组pGAPZe~的构建 程太平 ，刘 超 ，荣 俊 (长江大学 a．动物科学学院．b．生命科学学 院，湖北 荆州 434025) 摘要 ：以RT—PCR扩增新城疫病毒 JZ05株 F基 因F1片段和 F2片段 ，以核酸 内切酶 nI和XbaI对 目的基因片段及质粒 pGAPZ(xA进行酶切 ．连接酶切产物 ．转化 Eacterium coliDH5 以PCR方法确定 JZO5F1的阳性重组子为 2个．JZ05F2的阳性重组予为4个。对阳性重组子进行酶切鉴定及序 列分析， 结果发现．重组质粒pGAPZc~A—F1、pGAPZc~A—F2及质粒pGAPZc~A的酶切 电泳条带与试验设计 大小相 符 ；基 因测序得到的重组子 中FI和F2序列长度分别为 1198bp、269bp，与新城疫病毒 JZ05株 F基 因 序列比对．其序列长度和核苷酸排列完全一致。这表明重组质粒 中目的基因片段的核苷酸序列 、大小和 插入位置是正确的．为以酵母表达系统表达Fl和 F2、研究强毒株与弱毒株 F蛋白的抗原性差异程度及 研制重组亚单位 疫苗打下 了基础 关键词 ：新城疫病毒 ：，基 因：质粒pGAPZc~A：重组 中图分类号：$852．650；Q78 文献标识码：A 文章编号：0439—8114(2009)ll一2639—03 Recombination ofPlasmid pGAPZoLand F Gene ofNewcastle DiseaseVirus CHENG Tai-ping,LIU Chao*,RONG Junb (a．CollegeofAnimalScience；b．CollegeofLifeScience，YangtzeUniversity，Jingzhou434025，Hubei，China) Abstract：TheF1andF2 ofF geneofNewcastle diseasevirusisolation JZ05wereamplifiedwith reverse transcription—p0ly— merasechainreaction，the goalgenepiecesandplasmid pGAPZ(xA weredigested with nIand XbaI，digested pieces were linked with DNA ligase，Ecxterium coliDH5ctwere transformed by the linked outcomes．Positive recombinantswere distinguishedwithpolymera~echainreacll。n，nnd I_ccoII1t,inan[sof2c01()nies0fJZ05F1werepos{tive，Feeomblnantsof4 colonies ofJZ05 F2 were positive．Positive recombinantswere identified with endonuclease digesting and DNA sequence analysis．RecombinantplasmidpGAPZctA-F1，pGAPZc~A-F2 andplasmidpGAPZtxA weredigested withKpnIandXbaI， the positionsoftheir