反相高效液相色谱法测定牛奶中的主要蛋白质.pdfVIP

第 37卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究简报 第 11期 2009年 11月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 1667～1670 反相高效液相色谱法测定牛奶中的主要蛋 白质 王 娟 张庆合 王志华 李红梅 (北京化工大学 ，化工资源有效利用国家重点实验室 ，北京 100029) (中国计量科学研究院，北京 100013) 摘 要 建立了测定牛奶中的主要蛋 白质 的反相高效液相色谱法 ，对前处理方法进行了优化 ，采用 Agilent Zorbax300SB—C8(250mm×4．6mm，5Ixm)色谱柱，三氟乙酸-水一乙腈流动相梯度洗脱 ，214nm检测 ，柱温 45℃，外标法定量。测定 K-CN， 一CN， srCN，卢-CN，Whey和 Igg的线性关系 良好 ，相关系数均大于 0．999，加标回收率在 74．8％一132．5％之间。大豆蛋白质不影响分离与检测。采用本方法分析了9种牛奶样 品中上述蛋白质的含量与总量 ，结果表明，本方法测定结果准确可靠。不同样品中4种酪蛋 白与乳清蛋白的 比例基本接近，但是不同品牌之间存在一定差异。 关键词 高效液相色谱 ，牛奶 ，蛋 白质 1 引 言 牛奶蛋白质的氨基酸组成与人乳较相近，而且含有人体内不能合成的8种必需氨基酸，且氨基酸构 成比例较平衡，合成人体蛋 白时生物效价高，氨基酸的利用率也高。由于牛奶蛋 白质的营养价值高，其 食用安全性和品质受到广泛关注。牛奶蛋白质主要是酪蛋 白和乳清蛋 白，其 中酪蛋 白约 占蛋 白质总量 的80％，酪蛋 白主要包括 ，(一CN，O／。一CN，Ot一CN和卢一CN；乳清蛋 白包括 Ot—La，卢一Lg以及少量的BSA和 Igg。检测与监控上述牛奶蛋 白质对于控制牛奶质量、避免非法添加具有重要意义。由于蛋 白质性质接 近、且受脂肪含量等基体成分影响，因此需要对其进行适当的前处理与分离。目前 ，主要采用液相色谱 法 ]、毛细管电泳法 ]、凝胶电泳与等电聚焦 等方法。相对而言，液相色谱法具有简单、准确、重 现性好等优势。 ． 本研究采用反相液相色谱法检测牛奶 中主要蛋 白质，建立 了牛奶 中主要蛋 白质的检测方法，并对 9种牛奶 中主要蛋白质的含量与分布进行了检测与比较。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 高效液相色谱仪 (日本岛津公司)由2个LC-2OAT溶剂输送泵、SIL一20A 自动进样器、CTO-20A柱温 箱、SPD—M20A二极管阵列检测器、LCSolution(Ver．1．21)工作站等组成。离心机 (德国Sartorius公司)； 微量振荡器(德国IKA公司)；超纯水器(美 国Millipore公司)；蛋 白质分析仪(美国CEM公司)。 盐酸胍和三羟甲基甲烷 (Bis一 s，北京 Biotechnology公司)；二硫苏糖醇 (LotR1／83／030，98％， Inalco公司)；蛋白质标准品(K-CN，OLslC·N，Ods2一CN，一CN，Whey以及 Igg，美 国Sigma—Aldrich公司)， 重新定值 ；三氟乙酸和乙腈 (色谱纯，Tedia公司)。9种牛奶样品均购 自当地超市。 2．2 样品制备 标准溶液制备：分别称取适量标准品，用 2mL溶剂 A(由0．1mol／L三羟 甲基 甲烷 (Bis—Tris)、 6moL／L盐酸胍、19．5mmoL／L二硫苏糖醇、5．37mmol／L柠檬酸钠 4种溶液混合而成)溶解 ，混匀，缓慢 摇动避免产生气泡，加入 6mL4．5moL／L盐酸胍-()．1％三氟 乙酸 (TFA)的水溶液稀释 ，混匀，用 0．22 m滤膜过滤。卢一CN，O／s1一CN，C~s2-CN，，c-CN，Igg和Whey的浓度分别为5．354，2．637，0．423， 1．752，2．160和 3．088g／L。 20094)4-04收稿；2009-06-23接受 本文系国家 自然科学基金(No和国家科技支撑计划 (No．2006BAF07B03)资助项 目 } E·mail：Zhangqh@ nim．ae．cn