脑脊液单核细胞内结核抗原检测对结核性膜炎早期诊断的意义.pdf

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中文摘要 膜炎3例,变态反应性脑炎10例,新型隐球菌脑膜炎4例, 脑囊虫病3例,单纯疱疹病毒性脑炎2例,多发硬化3例, 其他神经系统疾病9例。对所有患者均进行脑脊液常规、生 化,细胞学检查(MGG染色),墨汁染色和阿利新兰染色。 同时用免疫荧光的方法检测单核细胞内的结核菌PPD抗原, 取脑脊液lml,用FMU-5型玻片离心机离心玻片3张,进行 免疫荧光染色。将沉淀有细胞的玻片放入冷丙酮中4C固定 缓冲液,pH为7.4,以增加细胞膜的通透性)缓冲液冲洗3 次,每次5分钟,再移入含有3%正常羊血清的TBS中孵育 30分钟,用滤纸吸干后滴加兔抗结核抗体IgG,4℃冰箱孵 育过夜。取出后用TBS-T缓冲液充分冲洗,吹干后滴加荧光 素标记的羊抗兔IgG,37℃孵育30分钟。TBS-T缓冲液冲洗, 伊文思兰衬染3分钟,再用TBS洗两次。吸干水分,用缓冲 甘油封片,荧光显微镜观察。阳性结果为单核巨噬细胞的胞 浆黄绿色荧光染色。以TBS缓冲液替代一抗为阴性对照。上 述指标动态观察,每隔5~7天检测一次,连续检测3次以 上。 结果:l、细胞学表现:结脑组脑脊液中以嗜中性粒细 胞为主的混合细胞反应12例,以淋巴细胞为主的混合细胞 反应14例,单纯混合型细胞反应4例,淋巴样细胞反应5 例,阿利新兰染色和墨汁染色均阴性。对照组脑脊液中混合 型细胞学反应15例,淋巴样细胞反应17例,4例隐球菌脑 膜炎患者CSF中可见隐球菌,阿利新兰染色和墨汁染色均阳 性,脑囊虫患者显示嗜酸性粒细胞增加。在动态观察中显示 结脑病人随治疗好转中性粒细胞逐渐减少,但持续较长时 中文摘要 间,同时激活的淋巴细胞单核细胞逐渐增加,浆细胞出现, 这与结脑动态变化相符。2、单核细胞内结核抗原检测的结 果:早期即可在CSF中检测到单核细胞内的结核抗原,大多 数单核细胞都有较强的胞浆染色,且多次检测可持续阳性。 激活单核细胞较少染色或染色较浅,早期嗜中性粒细胞胞浆 也有染色,但持续时间短。在35例结脑患者中阳性者29 例,均至少连续2次检测阳性,敏感性为82.9%,发病≤14 天者15例阳性,占93.8%,15~30天者11例阳性,占84.6%, 30天者3例阳性,占50%。对照组无一例阳性,特异性为 100%。结脑病人的动态观察显示,最早在发病6天即可检测 出胞内抗原,连续2次阳性者29例,3次阳性者25,4次 及4次以上阳性者20例。部分病例在病情好转后单核细胞 内结核抗原检测可以转阴。 结论:本实验通过用免疫荧光法检测结脑患者脑脊液 单核细胞内的结核抗原,成功的建立了结脑患者脑脊液中细 胞内结核抗原检测的方法。 本研究显示在结脑的早期即可在CSF中检测到单核细 胞内的结核抗原,且多次检测可持续阳性,证实了结核菌可 进入单核细胞并得以存活。并且结核菌进入细胞内,发生在 抗原呈递、细胞免疫和体液免疫之前,可以解决早期诊断的 问题。 结核菌的控制主要依赖于单核细胞的活化,活化的单核 细胞可以降解、清除结核菌。本实验也发现激活的单核细胞 很少染色或染色较浅,说明其中的抗原含量较低,这也证实 了上述观点。 结脑病人的动态观察显示,最早在发病7天即可检测出 中文摘要 胞内抗原,发病早期检测的敏感性高,随病程延长敏感性下 降,部分患者在病情好转后单核细胞内结核抗原检测可以转 阴。这也说明该方法适于早期诊断。 该方法敏感性为82.9%,特异性为100%,快速、简便, 在发病早期即可检测出细胞内抗原,且特异性较高,是结脑 早期诊断的有效手段。 关键词:结脑;脑脊液;单核细胞内结核抗原;免疫 荧光;诊断 4 英文摘要 the of ofdetection Thevalue antigens in in ofCSF

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