牛胚胎细胞克隆研究中存在的问题及产业化前景展望.pdfVIP

中国畜牧兽暇学会动物繁骥学分会第十童届学术研讨会论文集 ilitjiililll IIIIIIIliilV,,,II,,J!,, IIIIII J戮舞罾曼篡皇鼍 牛胚胎细胞克隆研究中存在的问题及产业化前景展望掌 子迸亮柏学进董方圆董雅娟” 莱黼农学院动物殛骆麓程中心 函恭膏麓 266109 摘要 牛细胞核移植技术敷格体细胞核移植和胚胎细胞核移植，基手现阶段细胞核移植技拳 产业化可能褴研究，本文重点对争释骀细胞棱移植技术的研究效率、影响鼙素、毒在的麓题和 产业化前景进行前瞻性的综述。 关键词 牛； 胚胎细胞；核移植； 产业化； 动物蔗隆披零是近年来生物学研究酶热悫，随着崤攀乞动物尧隆技术的不凝完善纛技术体系的建 立，该毅术畜赘蓑大麓理论意义帮广爨斡巍用前景。在理论上，它证甓了高度分诧的钵细胞经去分 化、重编程之斌，可以恢复到初始期具鸯发枣的全能性；在实践中，动物巍隆技术可数应用于畜牧 北生产、保护濒危珍稀动物、基础学科以及医学等领域。细胞核移植技术舆有能使遗传性状优秀的 个体大量增殖，撕决育种进震，扩大转基因动物后代数量，提高转基因效摩，满足生物学医学研究 憨特殊煮要等优点，决定了纲魏核蓼毽技术蕴涵着巨大翦商照察社会赞值。 世界首例乳腺细胞克隆绵羊“多莉”111诞生之后，体细胞克隆小鼠翻、牛f3】、山羊湖期猪惭1也耀 继获得成功，但遥其核移植效率仍然非常低，其水平还处予试验研究阶段，特别体细胞核移植能导 致熏梅胚发育严萤撵常，造成妊娠早期高流产率耜凄生后离死亡率fl】，产鼗化发展还有较远的路程。 然藤，胚黧缨藏孩移植援本与胚胎分裁、卵裂球培养等技术整会，尧隆技术产蛙位将成为冒缝。坯 胎细胞克淹技术不仅能降低胚胎的生产成本，扩大坯源，丽鼠大大提高了生产遗传阿质动物的效率。 梵其是在近二十簪的研究中取褥了很大成就，在适当麓条件下，牛、羊胚胎核移德成功率对达24％C7J。 因此，目前，在体细胞核移植效率低、家畜胚胎千细胞建系困难的情况下，胚胎细胞核移植以及继 代核移植(弄克隆)就成为大爨获褥遗德上完全糖阕的壳隆系动物，进而摧动胚胎细胞核移楗产业化 进疑麓瑾恕手段。 {胚胎细胞核移植的国内外研究进震 l知秘缨魏憝麓俸援供俸，获褥了7头获褥来盔阕一核供体胚骀魏犊牛，移植成功率菇20％t9l，并 尝试用第l代(原代)核移植胚胎作为供体，进行继代核移植，获得了妊娠，甚至通过多代核移植， 一胚胎的发育至黎葚胚的克隆胚胎，并对各世代核移植的效率进行了详细研究，褥到了第1代刭第 了第3栽核移植牛犊拉玛。在我瀑，李雪蜂等(1996)采用完全体井诧方法获得了坯骆细胞核移植牛 u引，但牛继代核移棱还未见成功的报道，阶段性进展的研究也甚少。 2影响胚胎细胞核移檀效率的关键蠢素 尽管菝移植鲢平均效率翌缀有了缀大斡提高，徨锯存在较多篱遂器餐。其藏因在予核移菝蘑重褥 胚核重编程不完全，核移植后重编程过程包括染色体结构的煎建、DNA甲基化和 缀蛋白乙酰化的总体改变、印迹基因的表达、端粒长度的恢复、x染色体的失活，以及其他早期胚 黢发育裳闼的变化。就终受体卵母细脆豹选择、核移槭前供体缎胞|j}器受体细胞阕步佬处理以及去核 方法也影嚷着核移植效率。 2．1供体纲胞的细胞餍期 崤乳动物胚胎细胞作为核供体时，供体拨太多处予S期，这～方谣是卷于随受精卵的分裂，草 期胚胎细胞体积渐渐变小，细胞生长受透明带限制，另一方蕊是由于母源性基因产物和细胞成份使 313 枣匿畜牧甍医学会动物繁殖学分会第+三属学本研讨会论文集 早期胚胎不需要合成供自身发育的物质，所以G1期缺乏或很短，而胚胎细胞能够集中进行染色体 复制与分裂。在旱期殛胎发育阶段，隧棍剥用胚胎细胞俸为核移植静供体核时，供体大多处予S裳。 而S期核与分裂中期胞质融合时，会引致异源性染色体过早凝缩(PCc)。 2．2受体卵母细胞的选择 2．2．1受体舞母细胞质与供核纽胞周期的一致挂 供体核与受体细胞质问的相甄作用，对其融合屠的正常发育起着决定性作用[151。一般认为，核 质处在相同的细胞周期有利于重构胚的发育。如将G1期的供体核移入到去核的成熟卵母细胞中， DNA合成与正常憝胎缁耱Gl期核DNA合成相似，臆葳对染色体的影嚷较小，可形成正鬻熬赤遴 板和纺锤丝；如将s期的核供体移入到去核的成熟卵母细胞中，导致染色体晃常n6】发生非均