白藜芦醇合酶基因在花生茎中表达的RNA原位杂交研究.pdfVIP

论文摘要 第八届全国工业生化与分子生物学学术大会论文集 自藜芦醇合酶基因在花生茎中表达的RNA原位杂交研究 叶冰莹1陈由强’黄国强1陈如凯2 (、r．福建师范大学生物工程学院，福州350007；2．农业部甘蔗生理生态与遗传改良重点 开放实验室，福州350002) 自藜芦醇合酶(Resveratrol Synthase， PS)是芪合酶(Stilbene 体提取的自藜芦醇，具有抗菌、抗脂质过氧化、降低固醇和抗诱变等多种药理作用， 并确认其为抗肿瘤剂和治疗心血管疾病的有效成分。本研究利用RNA原位杂交技术， 取花生自藜芦醇合酶基因片段，体外合成带地高辛标记的反义RNA探针：以此为探 针与花生茎组织切片进行原位杂交，精确显示该基因在组织细胞中表达产物的分布及 表达量。以及外界诱导因素对该基因表达的调节特性。研究表明，该基因的转录表达 与维管组织有关联，主要集中在初生韧皮部而非初生木质部。酵母提取物处理可使基 因的转录表达水平明显增加。通过研究．确定该基因经诱导后在茎各组织上的空间表 达及表达量上是否存在差异，也为进一步应用原位杂交技术对该基因的表达、调控及 相应启动子的诱导特性进行深入研究提供基础。 本研究经切片制备、探针的制各、预杂交、杂交、杂交后处理后，将免疫反应后的切 片置入双蒸水中快速洗涤；梯度酒精脱水，二甲苯透明：树胶封片观察，细胞组织中有蓝 紫色沉淀物为阳性反应。 结果表明：在花生幼茎的初生韧皮部(Ph)的细胞中有大量蓝紫色沉淀物出现，而在 组培苗多且明显(图C)，累积的部位主要集中在初生韧皮部的筛管细胞和薄壁细胞，其他 薄壁细胞及初生木质部细胞中都未见明显的阳性反应。 由此可见白藜芦醇合酶基因的表达累积主要在初生韧皮部的筛管细胞和薄壁细胞(传 递细胞)，初生木质部和周边其它薄壁细胞及组织中都未见明显表达，具有表达的特异性。 这可能与维管束中筛管细胞和维管薄壁细胞的物质积累、装卸和转运功能有关，由此可见 该基因的表达产物可能在韧皮部产生作用，利用相关底物合成白藜芦醇及其苷类；再通过 韧皮部的运输，积累到作用部位。这还需在其它器官进行空间表达特性上的研究，而后才 能最后定论。经酵母提取液处理后，其mRNA的表达量明显比未经处理的组培苗多且明显， 这与Melchior F(1991)等人的研究结果相符。可见该基因的表达具有诱导性。由于不经 酵母提取处理的表达量及其微小，因此该基因是否在生长发育过程中，具有时间上的表达 差异还需进一步研究确定。 170 蔓丛旦全垦三兰竺竺垡量坌王生塑堂兰查查垒堡塞叁 堡壅塑茎 图RS基因在花生茎表达的原位定位(茎横切) A．B．示维管束(Vb，vascularbundle)及周边髓部(Pi，Pith)、皮层的薄壁细 胞(100×)；C．D．示维管柬中的初生韧皮部和初生术质部细胞(400×)； A．B．D．酵母提取物处理8h；C．未经酵母提取物处理； Pa(parcnchymatouse∞11)示薄壁细胞，Ph(protophloem)示初生韧皮部Xy (protoxylem)示初生木质部，Co(Codex)示皮层 171