一株光合细菌与分离鉴定及污水处理能力研究.docVIP

一株光合细菌的分离鉴定及污水处理能力研究 周洪波，刘飞飞，邱冠周 中南大学资源加工与生物工程学院，湖南 长沙 410083 光合细菌（photosynthetic bacteria, 简称PSB）是一种在自然界广泛存在的具有光能合成体系的原核微生物，除可用作饲料添加剂外，还具有在好氧、微氧、厌氧多种条件下代谢废水中有机化合物、难降解卤化物等的能力，具有一定的工农业应用前景。本实验以实验室废水处理反应器活性污泥为材料，采用液体富集培养、平板反复划线分离方法，得到一株光合细菌，命名为PSB-O。经菌落形态特征、细胞形态特征、活细胞光吸收光谱特征、生理生化特性及16S rRNA基因分析，将PSB-O菌株鉴定为Rhodopseudomonas sp.。将该菌用于连续培养反应器处理合成有机废水试验，结果表明PSB-O可以有效去除合成有机废水中的COD，在稀释率为0.025 h-1时去除率达到最高62.8%，可以用于有机废水处理。 光合细菌；鉴定；生长特性；有机废水A 文章编号：1672-2175（2006）05-0901-04光合细菌photosynthetic bacteria，简称PSB是自然界中广泛存在、具有原始光能合成体系的原核生物，能在厌氧条件下进行不放氧的光合作用，现有19属约49个种[1]。PSB可用作饵料、饲料、菌肥，还可生产生物降解塑料和杀虫剂等[2-4]。由于光合细菌可广泛利用多种有机物在好氧、厌氧和微好氧条件下进行多种方式的生长代谢，在有机废水的净化处理中具有明显优势。PSB不仅能够降解简单的有机化合物，还能处理环境中较难降解的卤代化合物和芳香化合物。目前光合细菌已在近几十种有机废水处理中得以应用[5-8]。和传统活性污泥法相比，PSB处理法具有以下特点：有机质负荷高、设备规模小、动力消耗低、占地面积小、脱氮除磷效果好、管理简易，以及产生的菌体可综合利用，不存在污泥处理问题等优点。因此利用PSB处理高浓度有机废水是非常有前途的环境微生物技术。作者从实验室活性污泥样品中分离到一株光合细菌，通过形态和培养特征的观察、生理特征研究以及16S rRNA基因序列分析，将菌株鉴定为Rhodopseudomonas sp.；同时，对该菌处理有机废水的能力进行了初步研究。 ① 液体富集培养基：CH3COONa 3.0 g，CH3CH2COONa 0.3 g，NaCl 1.0 g，(NH4)2SO4 0.3 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，K2HPO4 0.7 g，CaCl2 0.05 g，MnSO4 0.0025 g，FeSO4 0.005 g，酵母膏 0.1 g，谷氨酸 1.0 g，蒸馏水定容至1 L，调pH7.4。 ② 固体分离培养基：CH3COONa 3.0 g·L-1，酵母膏 3.0 g·L-1，CaCl2 0.3 g·L-1，MgSO4·7H2O 0.5 g·L-1，琼脂 20 g·L-1，调pH7.4。 采用液体培养和琼脂平板法相结合，反复多次挑取单菌落进行培养以获得纯培养物。 培养条件：从本实验室依据连续进水周期循环活性污泥工艺（CASS）构建的污水处理反应器（反应器温度25 ℃，DO质量浓度4 mg·L-1，连续稳定运行30 d）中取少量活性污泥样品于装有120 mL富集培养基的125 mL血清瓶中富集，置于光照培养箱中30 ℃培养，照度为2000 1x。6~9 d后，液体培养基变为红色，经摇床振荡稀释处理后，涂布和划线于平板固体培养基上，置于恒温培养箱中黑暗好氧培养，7 d后获得单菌落。在平板固体培养基中重复划线3次以上，直到在显微镜下观察为纯菌。 观察平板上生长的单菌落；菌体形态采用普通光学显微镜观察与扫描电子显微镜观察相结合；电境型号为JEOL JSM－6380LV扫描电子显微镜。 取适量液体纯培养物在7000 r/min×10 min离心洗涤3次，悬浮于w=60％蔗糖水溶液中，用岛津UV3000型紫外可见分光光度计在波长300~650 nm扫描。 以不含有机酸，且无生长因子的无机盐培养基作为基础培养基（即除去乙酸钠、酵母膏、谷氨酸的富集培养基），分别加入最终质量分数为0.3%的各种碳源，厌氧光照培养14 d后观察试验结果。 用去除（NH4)2SO4、谷氨酸、酵母膏的富集培养基作为基础培养基,在基础培养基中分别加入1 g/ L 的下列氮源物质蛋白胨、NH4Cl 、NaNO3 等, 进行培养、观察。 将酵母膏和NH4Cl减半的富集培养基灭菌后调成不同的pH值，分别为5.5，6.3，7.2，8.0。接种后，用100 mL的生理盐水瓶，30 ℃，光照培养。不同时间取样测定培养液的吸光度值（660 nm），并用pH计测定培养液的最终pH值。 细菌基因组提取采用上海生工生物工程技术服务有限公