饲料中维生素E的快速测定方法.docVIP

饲料中维生素E的快速测定方法  摘要：用简便快捷的方法测定饲料中的维生素E，试剂消耗少，稳定性强，回收率也较为理想。 关键词 维生素E 快速 测定 维生素E又称生育酚可防止脂肪化合物、维生素A、硒(Se)、两种硫氨基酸和维生素C的氧化作用提高维生素A的作用GB／T17812—1999饲料中维生素E含量的，需经过皂化提取浓缩几个步骤，耗时长、过程繁琐、消耗试剂多等局限性。α-生育酚）标准溶液 1.3.2.1 dl-α-生育酚标准储备液：准确称取dl-α-生育酚纯品油剂（USP）100.0mg于100.0mL棕色容量瓶中，用正己烷溶解并稀释至刻度，混匀，4℃保存。该储备液浓度每毫升含维生素E1.0mg。 1.3.2.2 dl-α-生育酚标准工作液： 准确吸取dl-α-生育酚标准储备液（1.3.1.1）1.00mL置于10mL棕色容量瓶中，用氮气吹干，用甲醇稀释至刻度，混匀，再按比例稀释。配制工作液浓度每毫升含维生素E50μg。 1.4 色谱条件 色谱柱为 Zorbax SB-C18 5μm 4.6×150mm（或相当型号色谱柱）,流动相为95％甲醇(色谱纯)，流速1.0mL/min，柱温为室温，检测波长280nm，进样体积20μL。 1.5 试样的提取 称取适量样品与100mL棕色容量瓶中（维生素预混料0.5g,复合预混料5－10g），加甲醇80mL，置于50℃水浴中，超声提取15分钟，其中每5min取出用手振摇一次。超声结束后，取出冷却至室温，用甲醇定容至刻度，混匀。取上层清夜过滤或离心，再经0.45μm膜过滤，供高效液相色谱分析用。 1.6 回收率的测定 取适量维生素E标准储备液于100mL棕色容量瓶中,用氮气吹至快干,再称取5g空白样品,使维生素E的含量分别为50μg/g、100μg/g和500μg/g，每个浓度点配制5份样品，求其平均回收率。按1.5项下的方法处理后进行色谱分析，以外标法计算含量，以测得量与添加量之比来计算回收率。同时按GB/T17817－1999测定回收率，比较测定结果。 2 结果 2．1标准曲线 维生素E的线性回归方程为：y=4.3513x-0.41858,线性范围是：5μg/mL--300μg/mL,相关系数r＝0.9999(如图1)。 图1.维生素E标准曲线 2.2回收率测定结果见表1，其高效液相色谱图见图2 回收率测定结果（表1） 添加浓度（μg/mL） 20 50 100 实测浓度（μg/mL） 20.6 49.7 99.8 平均回收率（％） 103 99.4 99.8 变异系数RSD％ 1.9 1.2 0.8 图2 高效液相色谱图（A维生素E标准工作液，B空白样品，C添加样品） 2.3与GB/T17812-1999测定结果的比较 按GB/T17812-1999同时测定添加样品回收率，结果如表3 回收率测定结果（表3） 添加浓度（μg/mL） 20 50 100 实测浓度（μg/mL） 18.4 48.8 98.2 平均回收率（％） 92.0 97.6 98.2 由表2可见，GB/T17812处理样品回收率偏低，由于前处理要经过皂化、提取、浓缩等几个步骤，操作人员稍有不慎就有可能造成样品损失，特别是皂化后样品中天然的生育酚释放出来，而生育酚在碱性环境中不稳定，皂化后必须尽快提取，否则会使回收率偏低。 3.讨论与结论 上述试验表明用这种快速方法测定饲料中维生素E的含量简便快捷便于操作，省时省力，回收率高，是一种较为理想的前处理方法，适合大批量样品检测。 9.293 DAD1 B, Sig=280,16 Ref=350,100 (VADE07Z\024-3301.D) A 17.5 15 12.5 10 7.5 5 2.5 0 -2.5 -5 mAU 11 10 9 8 7 6 5 4 min DAD1 B, Sig=280,16 Ref=350, 100 (VADE07Z\025-3401.D) B 0 0 10 0 mAU 11 10 9 8 7 6 5 40 4 min 4 5 6 7 8 9 10 11 mAU 0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 DAD1 B, Sig=280,16 Ref=350,100, TT (VADE07Z\035-4301.D) C 9.297 min