饲用乳酸菌生长动态模型的建立及分析.docVIP

饲用乳酸菌生长动态模型的建立及分析 张董燕，季海峰(，王四新，王雅民，刘辉，王晶， 侯成立 （北京市农林科学院畜牧兽医研究所，北京 100097） 摘要:为了验证罗伊氏乳杆菌优化培养基的效果，本试验采用Logistic方程，以生物量为测定指标，建立了罗伊氏乳杆菌生长动态模型。结果表明，罗伊氏乳杆菌的生长动态模型为：Cx(t) =0.8303·e0.1982t /｛1－(0.8304/7.8306y)(1－e0.1982t) ｝，该模型计算值与试验值数据拟合良好，表明该方程能较好地反映罗伊氏乳杆菌的生长规律，从而为菌株进一步的工业化生产提供了理论模型。 关键词：乳酸菌；生长动态模型； 非曲线性拟合 乳酸菌是人和动物肠道的正常菌群，众多研究证明，乳酸菌在促进动物生长，抑制有害菌的繁殖，降低机体胆固醇，提高机体免疫力等方面具有重要的作用[1～3]。Chaitow[4]指出治疗用的乳酸菌制剂，在有效期应保证活菌含量不低于107个/g。因此，乳酸菌产品中高浓度的活性菌体是其发挥功效的必要条件[5]。然而，菌体生长是一个动态变化的过程，在实际生产中，一般选择生长对数期末期收获菌体，如果能适时补充营养物质，延长对数期，从而为生产提供较高浓度的活性菌体。因此，掌握微生物菌体的生长规律至关重要。研究认为，生物量（Biomass）是表征微生物生长状况的一项基本参数,它主要通过测定底物干重来推断细菌生长状态或代谢活力[6]，菌体生物量的测定是其在发酵过程中的生长及底物消耗的直接反映。目前，国内外在真菌方面有大量此类的报道，而在细菌方面主要集中于菌种选育、发酵优化培养等方面，对于乳酸菌生物量及其生长动态模型方面的研究较为少见。本试验为提高乳酸菌的活菌数而对其进行了培养基优化，为了验证此种优化培养基的效果，以菌株在发酵过程中的生物量为测定指标建立了菌体生长动态模型，从而监测菌株在发酵过程中的生长规律，也为该菌株进一步的优化培养及工业化生产提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 试验菌株 以罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）ZR2为试验菌株，来源为仔猪盲肠。 1.2 培养基 MRS培养基：蛋白胨10.0 g，牛肉膏 10.0 g，酵母粉5.0 g，葡萄糖20.0 g，无水乙酸钠5.0 g，柠檬酸二氨 2.0 g，吐温-80 1.0 ml，磷酸氢二钾2.0 g，硫酸镁0.58 g，硫酸锰0.19 g，蒸馏1000 ml，pH为6.5，121℃灭菌20 min。 优化培养基：麦芽糖20 g，酪蛋白胨15 g，酵母粉5 g，磷酸氢二钾4 g，无水乙酸钠7 g，硫酸镁0.58 g，硫酸锰0.19 g，吐温-80 1ml，柠檬酸二氨2.0 g。 1.3 菌株在两种培养基下生长曲线的比较 采用MRS培养基和优化培养基，测定不同时间OD600nm值，比较罗伊氏乳杆菌在两种培养基下生长曲线。 1.4 乳酸菌生长动态模型的建立 采用MRS培养基和优化培养基，分别在0 h、3 h、8 h、14 h、19 h、21 h、24 h、测定1次菌体生物量。 生物量采用干重法进行测定。取100ml发酵液于5000rpm离心15 min，以无菌生理盐水洗涤2次离心，菌体在105℃条件下烘干至恒重，进行测定。 2 结果与分析 2.1 菌株在两种培养基下生长曲线的比较 罗伊氏乳杆菌在MRS培养基和优化培养基条件下生长OD600nm值见图1。由图1可知，罗伊氏乳杆菌在MRS培养基条件下，3h后进入生长对数期，19h时达到生长最高峰，而后稳定下来。在优化培养基条件下，菌株同样在3h进入对数期，而后OD600nm值持续上升。从图1也可以看出，在优化培养基条件下，罗伊氏乳杆菌生长明显好于MRS培养基条件下的生长。 氏乳杆菌在两种培养基条件下生长OD600nm值比较 图1罗伊氏乳杆菌在两种培养基条件下生长OD600nm值比较 2.2 菌体生长模型推导 细胞生长模型用Logistic方程来表述，其公式为： dCx/dt=k·Cx(1－Cx/Cm) 对公式进行积分后，可以得到生物量（Cx）与时间（t）的函数： Cx(t)=Co·ekt /｛1－(Co/Cm)(1－ekt) ｝ 方程转化处理后为线性方程，即： kt=ln(Cm/C0-1)+ln｛Cx/Cm-Cx｝ 注： Cx：时间为t时的生物量； C0：初始生物量； Cm:时间为无穷时的生物量，此处以时间为27h的生物量代替。 2.3罗伊氏乳杆菌生长动态模型的建立 由试验数据以ln｛Cx/(Cm－Cx)｝对时间t作图。 将罗伊氏乳杆菌在优化培养基条件下生物量试验数据代入上述方程，得到斜率k＝0.1982（h-1）。 将模