天癸更年软胶囊对老龄雌性大鼠线粒体功能影响的研究.pdfVIP

世界中医药学会联合会妇科专业委员会第四届中医妇科国际学术大会论文集 天癸更年软胶囊对老龄雌性大鼠线粒体功能影响的研究 申屠平平1。2，魏霞蓁1，王振林3郭剑峰3，宋兰兰1，康军1 1西安交通大学天奎医药生物公司，西安710061； 2浙江省金华市疾病预防控制中心，金华321000； 3西安交通大学医学院营养与食品卫生教研室，西安710061 天癸更年软胶囊是以沙棘脂肪酸为主成分的中药制品，前期研究已证明具有调节内分泌、调节 免疫功能、改善血液流变性和抗组织细胞衰老等作用，临床用以治疗妇女更年期综合征。本文为了 探索衰老形成的作用机制，以天癸更年软胶囊为外源性能量动力调节剂，以线粒体为抗衰老调控靶 标，观察老年雌性大鼠线粒体内膜蛋白及辅酶成分、呼吸链功能、ATP生成等调节因素对衰老形成 的影响，以揭示沙棘脂肪酸具有增加线粒体内膜蛋白及辅酶活性、调整改善呼吸链功能、促进机体 多功能组织、细胞的新陈代谢等作用[1】。 l仪器与材料 外分光光度计(浙江福立分析仪器有限公司)。 制成4．50 g．kg1、2．25 0401200，溶于同种赋形剂制成O．02mg．kg1乳剂)；赋形剂为0．72g．kgd的伯洛沙姆。 盒、总蛋白标准品、磷测试盒(南京建成生物工程研究所)：其余生化试剂均为分析纯。 究所实验动物中心提供。随机均分为5组：天癸更年软胶囊(以下简称天癸)高、中、低剂量组、雌 激素组、老年对照组； 另将13只6月龄雌性大鼠为青年空白对照组。 2方法 2．1 给药方法：大鼠按0．01mL．g-I体重每天定时灌胃给药，各组剂量如下：天癸高、中、低剂 组给予赋形剂。连续给药90d停药，空腹12h后，麻醉，取样。 2．2标本制备：动脉插管取血约2mL，室温静置2h，离心取上清，分装后-20。C冰箱保存。迅速 开腹，取肝脏，冰浴条件下制备肝匀浆，0。C高速提取线粒体，部分用于测定线粒体呼吸功能，其余 分装后．20℃保存。 氧电极法测定线粒体呼吸功能各项指标[21。②线粒体复合酶活性：按Veitch等的方法分别测定复合酶 I～Ⅳ活性【3】。③线粒体ATP合酶活性：用无机磷检测试剂盒测定Pi含量以代表ATP酶活性。线粒体 世界中医药学会联合会妇科专业委员会第四届中医妇科国际学术大会论文集 粒体琥珀酸脱氢酶活性：按照琥珀酸脱氢酶试剂盒说明操作。 2．4统计学方法：应用统计软件SPSSll．5进行单因素方差分析。 3结果 3．1实验大鼠一般状况：各组大鼠基本状况良好，用药2周以后背毛变得有光泽，绒毛感增强， 行动自如，未见其他异常表现；老年对照组大鼠行动较为迟缓，毛色粗糙成束，脱毛现象比较普遍， 老年特征明显。 3．2大鼠线粒体复合酶活性：与老年组相比，青年组及天癸高、中剂量组复合酶I明显升高， 比老年对照组酶活性升高；青年组、天癸高、中剂量组及雌激素组复合酶III活性显著高于老年组(P 天癸高中低剂量实验组复合酶Ⅳ活性高于老年组呈升高趋势。详见表l。 表1大鼠线粒体复合酶I．Ⅳ活性测定结果(nm01．mgq．min1，X±s) 注：与老年对照组比较，木PO．05，木木P0．01 3．3大鼠线粒体呼吸功能：与老年组比较，青年组、天癸实验组及雌激素组OPR升高，差异有 O．05)但呈升高趋势详见表2。 表2各组大鼠线粒体呼吸功能测定结果(nm01．mgprot1．min1，X士s) 注：与老年对照组比较，十PO．05，木木P0．01 291 世界中医药学会联合会妇科专业委员会第四届中IEt,z科国际学术大会论文集 3．4大鼠线粒体ATP合酶活性：与老年相比较，天癸实验组高、中、低剂量组和青年组ATP合 酶活性显著升高(P0．05或P0．01)。雌激素组ATP合酶活性(p0．05)见表3。 表3各组大鼠线粒体ArP合酶活性测定结果(pm01．mg-1．hourl，x±s) 注：与老年对照组比较，木PO．05，牛木PO．01 3．5 (PO．05)见表4。 表4各组大鼠线粒体Ca2+．ArP酶活性测定结果(1an01．mg-1hourl，x±s) 注：与老年对照组比较，·PO．05，木木PO．01 3．6大鼠琥珀酸脱氢酶活性：与老年组比较，