河豚毒素(TTX)论文：河豚毒素特异性单克隆抗体的制备.docVIP

河豚毒素(TTX)论文：河豚毒素特异性单克隆抗体的制备 【中文摘要】河豚毒素(Tetrodotoxin, TTX)是毒性最强的非蛋白类神经毒素之一,分布广泛,因最早从河豚鱼体内分离而得名。在众多河豚毒素的检测技术中,免疫检测技术因其灵敏度高和操作简便等优点受到人们的青睐,而免疫学检测的关键要素是目标物质的特异性抗体。本研究首先以牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)、卵清白蛋白(Ovalbumi,OVA)、匙孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)为载体蛋白,分别与TTX进行偶联以制备人工完全抗原。采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及紫外分光光度分析方法,优化了河豚毒素人工完全抗原(BSA‐TTX)的合成条件,并筛选出较佳的反应条件,即反应时间为72h、偶联剂添加量为12%、TTX与BSA质量比为1:5时河豚毒素免疫抗原偶联率较大。同时应用聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外分光光度法、红外光谱检测技术以及Quantity One凝胶分析软件计算偶联率等方法建立了人工完全抗原的表征体系。然后利用制备出的两种免疫抗原OVA‐TTX和KLH‐TTX免疫Balb/C小鼠,通过杂交瘤技术成功制备出两株杂交瘤细胞OVA 1E3和KLH CB2。两株细胞分泌的单克隆抗体均为IgM型,对两种单克隆抗体的特异性鉴定结果显示两种单抗均与TTX有特异性结合。此外