5-氮杂脱氧胞苷与曲古抑菌素A对膀胱癌细胞株ALDHla2基因表达及凋亡的影响.pdfVIP

· 378 · 2010年 3月第48卷第5期 ChinJSurg，March2010。Vo1．48．No．5 ． 论 著 5一氮杂脱氧胞苷与曲古抑菌素 A对膀胱癌 细胞株 ALDH1a2基 因表达及凋亡的影响 居正华 应敏刚 艾星 史涛坪 王保军 王超 张国玺 张旭 【摘要】 目的 探讨5一氮杂脱氧胞苷 (5-Aza—dC)与曲古抑菌素 A(TSA)对膀胱癌细胞中抑癌基 因ALDH1a2启动子甲基化状态和基 因表达及细胞凋亡的影响。方法 使用 5-Aza—dC、TSA处理 RT-4、253J、5637、BIU一87和 T24后，应用 甲基化特异性 PCR(MSP)法 、逆转录 PCR(RT—PCR)法 、 Westernblot法分别检测这5株膀胱癌细胞经药物干预前后 ALDHla2甲基化状态及基 因表达情况， 应用流式细胞学检测 干预前 后 5株膀胱癌细胞株的凋亡情况。结果 在 5株膀胱癌细胞 中， ALDH1a2基因表现为高甲基化表达受到抑制，TSA不影响甲基化状态，5oAza—dC可逆转高甲基化状 态并恢复基因表达，联合给予 5-Aza—dC和TSA的作用和单独给予 5-AzadC相似；TSA和 5-Aza—dC均 可诱导膀胱癌细胞株凋亡，早期凋亡是膀胱癌细胞株死亡的主要方式，5-Aza—dC和TSA有协同作用， 3个实验组与对照组 比较，差异均有 统计 学意义 (P0．05)。结论 在 5株膀胱癌细胞株中， ALDHla2基因启动子甲基化可能是导致其基因失活的主要原因；5-Aza．dC单独作用和5-Aza—dC及 TSA联合应用效果相似，均能恢复基因重新表达进而诱导膀胱癌细胞株的早期凋亡。 【关键词】 膀胱肿瘤； 细胞系，肿瘤 ；5-氮杂脱氧胞苷 ； 曲古抑菌素A； ALDH1a2基因 Effectsof5-Aza-2-deoxycitydineandtrichostatinA onexpressionandapoptosisofALDHla2genein humna bladdercancercelllines JUZheng—hua ，YINGMin—gang．AfX ，SHITao-ping，WANGBao— jun，WANGChaozHANGGuo—xiZHANGXu． DepartmentofUrology．FujianProvincialTumorHospita1． Fuzhou350014，China Correspondingauthor：ZHANGXu，Email：xzhang@ 咖 edtaca A【bstract】 Objective Tostudytheeffectonpromoterde—methylation，expressionofALDH1a2 geneandcellapoptosisbytreatedwith5．Aza—dC andTSA infivehumanbladdercancercelllines．M ethods HumanbladdercancercelllinesRT-4．253J，5637，BIU一87andT24wereculturedandtreatedwith5一Aza— dC and for1 A．TheexpressionoftheALDH1a2 genewasdetectedbyRT—PCR and Western blot．The methylationstatusofgenepromoterwasdeterminedbyMSP，andthecellcycleprofflewasestablishedby flow cytometry．Results ALDH1a2wassilencedinfivehumanbladdercancercell1ines．Re．expressionof ALDH1a2wasdetectedaftertreatedwith5一Aza—dCaloneorTSA incombination．ALDH1a2transcriptwas markedineachcelllinescombinedwith5一Aza—dC andTSA treatmentwhichshowedasynergisticeffecton expressionofALDH1a2 transcri