以amoA基因作为分子标记对工业焦化废水中氨氧化菌进行种群动态监测.pdfVIP

摘 要 本文根据功能基因的序列多样性能够反映功能菌群种类多样性的原理 用 氨单加氧酶 A 亚基基因 amoA 的专一性扩增 文库构建 物理图谱分型和序列 测定的方法 通过分析 amoA 基因的序列多样性组成 对工业废水处理系统中 氨氧化菌的种群动态变化与氨氮脱除效率的关系进行了初步研究 对某焦化厂 的A2/O 废水处理系统的氧化池在冬 夏2 个季节进行了4 次定点 定时采样 其中2 次氨氮脱除效率较高 分别为 62.10% 和 66.79% 另外2 次则偏低 分 别为 37.30%和-202.03% 直接提取悬浮污泥样品的总 DNA 作为模板 PCR 扩 增amoA 基因中491bp 的片断 将其克隆到p-GEM T easy 载体上并转化大肠杆 菌DH5 每个样品随机选择100 个转化子 提取质粒DNA 用限制性内切酶 TaqI 进行物理图谱分析 结果将这些转化子分为 3 种主要的类型 经测序后对 GenBank 做Blast 分析 类型I 与Nitrosomonas sp. GH22 有87%的同源性 可能 是新的amoA 基因类型 类型II 与Nitrosomonas nitrosa 有100%同源性 类型III 与 Nitrosomonas europaea 有 99%同源性 3 种类型的氨氧化菌在冬季和夏季的 种群组成比例变化与系统脱氨效率的波动关系的规律大体相同 降解效率高时 的2 次采样 类型I 分别占总数量的25% 25.2% 类型III 约占60.9% 64.8% 降解效率低的2 次 类型I 则分别占58.5% 51% 类型 III 占32.9%和 24% 类型II 在系统脱氨效率丧失时比例明显升高 在其它监测时间内基本保持不变 类型I 和类型 III 的种群水平可能分别与系统的脱氨效率呈负相关和正相关 而 类型 II 也可能是氨氮降解效率严重降低的重要标志 本研究为深入了解氨氧化 菌种群结构变化与系统脱氨效率的关系 为发展可以监测功能菌群结构变化的 分子标记奠定了基础 2 Abstract Ammonia-monooxygenase gene (amoA) have been used to detect and characterize ammonia oxidizing bacteria (AOB) in different environments. In this study, amoA gene was used as a marker to survey the relationship between AOB and ammonia removal efficiency. Through construction of amoA gene library, RFLP analysis and gene sequencing, the diversity of amoA gene was analyzed. Samples were collected from the aerobic tank for four times, 2 times in summer and 2 times in winter, from the A2/O wastewater treatment system in a coking factory. Ammonia removal efficiency were higher in two times (62.10%, 66.79% respectively) while in the other two times were comparatively lower (37.30%, -202.03%). Total DNA was extracted