【最新】猪瘟病毒NS3基因克隆、原核表达及间接ELISA方法初步建立【原创精品】---厌食.pdfVIP

微生物学通报 JAN 20, 2010, 37(1): 7884 Microbiology China © 2010 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 猪瘟病毒 NS3 基因克隆、原核表达及 间接ELISA 方法初步建立 1 1* 1 1 1 1 1 1 2 蒋大良 余兴龙 李润成 葛猛 罗维 颜爱 李杰 刘春红 涂长春 (1. 湖南农业大学 动物医学院 湖南 长沙 410128) (2. 军事医学科学院 军事兽医研究所 吉林 长春 130062) 摘 要: 采用PCR 方法从携带猪瘟病毒兔化弱毒(Hog cholera lapinized virus, HCLV)全长基因组 cDNA 的质粒pPOHCLV 中扩增到长度为2000 bp 左右NS3 基因序列, 并将其克隆至原核表达载体 pET-32a (+), 构建成重组原核表达载体pETNS3 。将pETNS3 在大肠杆菌Rosetta (DE3) 中进行优化 表达, SDS分析重组蛋白NS3 主要以包涵体形式表达, 分子大小约95 kD 。Western Blotting 分析表明重组蛋白NS3 具有免疫原性。采用Ni+ 亲和层析方法纯化得到重组蛋白NS3 (90%) 。以 纯化的重组蛋白NS3 为抗原初步建立了检测CSFV NS3 抗体的间接ELISA 方法, 检测221 份不同 猪群和年龄猪的血清样品。检测结果与 IDEXX 公司 CSFV-Ab 检测试剂盒检测结果进行对比, 阳 性符合率为 83.33%, 阴性符合率为89.38%, 总符合率为 86.43%。30 份存在差异的血清样品用间 接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence assay, IFA)进行检测, 结果显示IFA 检测结果与NS3 间 接ELISA 和IDEXX 公司CSFV-Ab 检测试剂盒符合率分别为 56.67%和43.33% 。 关键词: CSFV, NS3, 基因克隆, 原核表达, 蛋白纯化, 免疫印迹, 间接ELISA, IFA Cloning, Prokaryotic Expression of CSFV NS3 Gene, and Preliminary Establishment of an Indirect ELISA for Serum Antibody Detection JIANG Da-Liang1 YU Xing-Long1* LI Run-Cheng1 GE Meng1 LUO Wei1 YAN Ai1 LI Jie1 LIU Chun-Hong1 TU Chang-Chun2 (1. College of Veterinary Medicine, Hunan Agricultural University, Changsha, Hunan 410128, China) (2. Institute of Military Veterinary Research, Academy of Military Medical Sciences, Changchun, Jilin 130062, China) Abstr