第二章园二色性谱CircularDichroism(CD).pptVIP

主要内容 一. CD的发展 16世纪 Newton 光谱 17世纪 Huggens 偏振光 1881年 Biot 石英能使偏振光的偏振面旋转?圆二色性 1896年 Cotton发现了Cotton effect，为ORD和CD的出现奠定了理论基础 20世纪的六，七十年代，ORD和CD已逐渐成为研究分子结构的主要手段 至今 CD已广泛的应用到生物医药领域 二. CD的基本原理 椭圆偏振光的产生 圆二色性的产生 CD的Cotton effect 圆二色光谱仪 1. 椭圆偏振光的产生 2. 圆二色性的产生 3. CD的Cotton effect CD的Cotton effect曲线： △ε-λ曲线 曲线具有极大值或极小值 CD光谱与UV光谱的比较 在出现紫外-可见光吸收峰的情况下才可能出现圆二色谱的吸收峰, 即Cotton effect 。 CD光谱反映了光和分子之间的能量交换 目前，英，美等一些发达国家的国家实验室都建有专门的圆二色生物光谱实验站，将会使圆二色技术以其更为完善的功能和更为精确的结果成为科学工作者的得力工具 4. 圆二色光谱仪 圆二色光谱的应用 研究生物大分子结构 在医药和环境领域中手性物质的测定 研究生物大分子结构 推测蛋白质的二级结构及构象； 研究小分子与DNA 的相互作用方式： 嵌入作用、沟槽作用和静电结合 推测寡糖(或多糖)的一级结构和空间构象等结构信息 在医药和环境领域中手性物质的测定 在医药中, 对对映体进行分析及其纯度的测定是当前手性药物的合成、生产过程的质量监控以及药理学研究等的重要任务； 在环境中，对手性农药的对映体选择性和水样中对映异构体含量的测定已成为研究的热点； CD是测定手性物质的一种重要方法；能快速提供手性分子的绝对构型、构象、有关反应机理以及手性物质对映纯度的信息 α- 螺旋含量变化率计算公式： Δα为BSA 的α- 螺旋含量变化率; [α0]为无吸附剂时天然BSA 的α- 螺旋含量 [α] 为在TiO2上吸附后BSA的α- 螺旋含量 四 . 与CD联用技术 HPLC-CD 振动圆二色谱法 1. HPLC-CD 1980年, Drake等首次使用圆二色检测器，用HPLC实现了手性化合物的分离及纯度的测定； HPLC-CD的检出限为7.2ng， 线性范围2.5×10-5mol/L～2.5×10-3mol/L。 HPLC-CD技术的应用： 在非手性色谱条件下测定对映体纯度 手性化合物绝对构型测定 复杂基质中手性化合物分析 HPLC-CD技术的优点： 不需要对样品进行高温气化和衍生化处理 不需要手性固定相直接测定对映体纯度 被用于不对称合成中高通量的筛选催化剂 HPLC-CD技术的局限性: 不能实现分析的自动化 仪器比较昂贵 灵敏度相对比较低 2. 振动圆二色谱 将经典的圆二色性技术(一种与可见和紫外光区电子跃迁有关的光谱技术) 延伸至红外光区的分子振动跃迁。 不需要经过化学预处理，从一简单溶液中就可以获取很多典型的跃迁谱图 不需参比物对照就能确定试样分子的绝对构型和构象 在溶液中的试样分子在核磁共振谱的时间标尺内进行构象之间的快速相互转换,仍能求得其溶液构象的分布(而核磁共振谱只能提供其平均值) * 圆二色光谱 Circular Dichroism (CD) CD的发展 1 CD的基本原理 2 3 与CD的连用技术 4 CD的应用 X Y 线偏振光 频率相同,方向相反 振幅相同、相位相同 ? y y’ a x x’ R L 椭圆偏振光 频率相同,方向相反 振幅不同、相位不同 参 照 面 ?2 ?1 ? = tg-1[(|El – Er |)/(El + Er )] UV ? ?m ? Plane (linearly) polarized light Chiral 椭圆偏振光 Optically Active Sample 椭圆偏振光 Optically Active Sample Chiral Plane (linearly) polarized light Right and Left hand circularly polarized light Preferential absorption of left hand polarized ? A= lgI0/I =(1/2,303)lnI0/I =εCL Beer-Lanmbert Law ? =2.3