盐酸法舒地尔对体外培养大鼠神经干细胞分化的影响.pdfVIP

山东医药 2010年第 50卷第 9期 盐酸法舒地尔对体外培养大 鼠神经干细胞 分化的影响 沈 雷，张博爱’，贾延劫，石进峰，关文娟，赵二义，文全庆 (郑州大学第一附属医院、河南省高等学校临床医学重点学科开放 实验 室，郑州450052) 摘要：目的 观察盐酸法舒地尔对体外培养神经干细胞 (NSCs)分化的影响。方法 体外分离培养 NSCs，通过 不同浓度的盐酸法舒地尔干预后，采用免疫细胞化学及流式细胞技术检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤 维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果 分离培养的NSCs具有 自我复制、增殖能力，可以表达 Nestin；诱导分化后的细 胞可以表达NSE和GFAP。免疫细胞化学染色提示，盐酸法舒地尔干预组 NSE阳性细胞显著高于对照组 (P 0．05)，但是不同浓度盐酸法舒地尔之间元统计学差异 (P0．05)。流式细胞仪检测结果显示，盐酸法舒地尔干预 组NSE阳性细胞比例明显增加，与对照组相比有统计学差异 (P0．05)。结论 盐酸法舒地尔可以促进 NSCs向 神经细胞方向分化。 关键词：盐酸法舒地尔；神经干细胞 ；神经元；分化 中图分类号 ：R741．02 文献标志码：B 文章编号：1002-266X(2010)09-0028-02 神经干细胞 (NSCs)定向分化是神经科学研究 组织块，37℃、0．25％胰酶消化 2min；吸管吹打均 的热点之一。Rho激酶抑制剂可以提高胚胎干细胞 匀，离心弃上清，重新悬浮再次离心，反复3次；加入 的存活率，减少胚胎干细胞诱导分化的神经前体细 无血清培养基制成单细胞悬液，37oC、5％ CO、饱 胞的凋亡率 ¨ 。盐酸法舒地尔是临床常用的Rho 和湿度细胞培养箱 中悬浮培养，定期换液。培养 6 激酶抑制剂，广泛用于脑血管病 的治疗。2008— ～ 7d后形成较大体积的神经球克隆，将神经球传 2009年，我们应用盐酸法舒地尔干预体外培养的 代制成单细胞悬液，连续传 3代以上备用。将 NSCs NSCs，探讨其在 NSCs分化中的作用。 分为空白对照组和观察 1、2、3组，观察组分别加入 1 材料与方法 终浓度50、100、200I~mol／L的盐酸法舒地尔干预30 1．1 动物、试剂与仪器 出生24h内的Wistar大鼠 min，然后更换为无血清培养基继续培养 。 《SPF级)，由河南省实验动物中心提供。盐酸法舒地 1．2．2 NSCs的诱导及鉴定 将各组细胞接种于放 尔由天津红 日药业股份有限公司馈赠；Neurobasal培 有多聚赖氨酸处理载玻片的24孔培养板中，加人 养基 、B27、胎牛血清购 自Gibco公司；碱性成纤维生 10％的胎牛血清 、含2％ B27的Neurobasal培养基 ， 长因子(b-FGF)购 自Peprotech公司；胰蛋白酶、多聚 37℃、5％ CO 、饱和湿度细胞培养箱中培养 。倒置 赖氨酸购 自Sigma公司；兔抗大鼠多克隆神经元特异 显微镜下观察NSCs贴壁分化情况。采用免疫细胞 性烯醇化酶(NSE)抗体、兔抗大鼠多克隆胶质纤维酸 化学染色法检测 NSE和 GFAP细胞阳性表达率，流 性蛋 白(GFAP)抗体、兔抗大鼠多克隆巢蛋 白(Nes— 式细胞仪检测 NSE细胞阳性表达率。 tin)抗体购 自SantaCruz公司；荧光(FITC)标记羊抗 1．3 统计学方法 采用 SPSS13．0软件进行数据处 兔 IgG购 自博士德公司。COULTEREPICSXL流式 理，结果以x±s表示，组间比较采用方差分析和 ￡检 细胞仪为美国Beckman公司产品。 验。P≤0．05为有统计学意义。 1．2 方法 2 结果 1．2．1 NSCs的培养与分组 参照文献-3方法，无 2．1 大鼠NSC