几种不同热启动PCR系统的特异性、延伸性和灵敏度比较.pdfVIP

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2017-08-31 发布于重庆
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几种不同热启动PCR系统的特异性、延伸性和灵敏度比较.pdf

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几种不同热启动PCR系统的特异性、延伸性和灵敏度比较.pdf

文献参考 No. 2 几种不同热启动 PCR 系统的特异性、延伸性和灵敏度比较前言实验 1：特异性热启动是一种能够提高 PCR 特异性的成熟和简便的方法。然而，目前通用的技 HotMaster Taq 和普通 Taq 的循环条件：术如抗体介导的抑制 DNA 聚合酶法或化学阻断 DNA 聚合酶法都存在一些缺陷：无初始变性如需要较长的初始激活步骤，从而导致 DNA 聚合酶的工作能力下降或者特异性控 35个循环： 94℃ 1秒 55℃ 1秒制的效果不理想。 72℃ 5 秒 Eppendorf 公司的 HotMaster ® Taq Taq DNA 聚合酶则应用了一种全新的技术来保持10℃ 实现热启动 PCR。抗体阻断 Taq 聚合酶法 Taq 在高温下，可释放出热稳定的 Taq DNA 聚合酶抑制剂，因此立即恢复聚合酶（LTI Platinum Taq ）的循环条件：的活性。 95℃ 初始变性 2 分钟因为这个过程是可逆的，所以 HotMaster 不但能在反应的设置阶段提供热启 35个循环： 94℃ 1秒动控制，而且能使每个 PCR 循环达到冷终止的效果。 55℃ 1秒新的预先优化的反应缓冲液能自动调节镁离子浓度，因此确保无需优化镁离 72℃ 5 秒子浓度就能获得理想的反应条件。保持4℃ 化学阻断 Taq 聚合酶法材料 ® （AmpliTaq Gold ）的循环条件： ® Taq Eppendorf HotMaster Taq DNA 聚合酶