尼罗罗非鱼生长激素及其受体的cDNA克隆与mRNA表达的雌雄差异分析.pdfVIP

尼罗罗非鱼生长激素及其受体的cDNA克隆与mRNA表 达的雌雄差异分析* 马细兰 张 勇 黄卫人 刘晓春 林浩然 中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室，广州 510275 E-mail:ls32@ 摘 要 尼罗罗非鱼 (Oreochromis niloticus) 雌雄鱼生长差异明显，为了探讨其原因， 本文采用 RT-PCR方法克隆了尼罗罗非鱼生长激素（Growth hormone，GH）及其受体（Growth hormone receptor，GHR）的 cDNA 序列，并应用半定量 RT-PCR 方法比较了雌、雄尼罗罗非 鱼垂体 GH mRNA、肝脏 GHR mRNA、肌肉 GHR mRNA的表达差异。序列分析表明：GH开放阅读 框为 615 bp，共编码 204 个氨基酸；GHR 开放阅读框为 1 908 bp，共编码 635 个氨基酸。 以 RT-PCR方法研究了 GH、GHR在各组织的分布情况，结果表明：GH 仅在垂体中检测到有表 达，而 GHR 在所检测的 18 种组织中均有表达，其中以肝脏、肌肉、性腺、下丘脑、胸腺表 达量较高。以半定量RT-PCR方法进一步比较了雌、雄尼罗罗非鱼垂体GH mRNA、肝脏GHR mRNA、 肌肉 GHR mRNA 的表达量， 结果表明：雄鱼垂体 GH mRNA 和肝脏 GHR mRNA 的表达量均显著 高于雌鱼，肌肉 GHR mRNA的表达量则无显著差异，推测垂体 GH mRNA和肝脏 GHR mRNA表达 的雌雄差异是尼罗罗非鱼雌雄生长差异的主要原因之一。 关键词 尼罗罗非鱼 生长激素 生长激素受体 RT-PCR 雌雄表达差异 生长激素(Growth hormone, GH)是脊椎动物由垂体分泌的单链多肽，具有促进生长、加 快蛋白质合成、提高食物转化效率、提高广盐性鱼类渗透压调节能力等作用，是调节动物生 长最主要的内在因素之一（林浩然，1999）。GH 通过与靶细胞膜表面的生长激素受体 （Growth hormone receptor, GHR）结合，启动细胞内的信号传导机制，促进胰岛素样生长因子 （Insulin-like growth factor，IGF-I）的表达，再通过血液循环到达机体的局部组织， 促进组织细胞的生长和分化。GH 靶组织中 GHR的多少、功能的正常与否将直接影响到 GH 生 理效应的发挥，例如 GH拮抗 （Growth hormone resistance）或GH 反应迟钝 （Growth hormone insensitivity ，GHIS）病人出现生长缓慢，其原因在于他们的 GHR 基因发生了变异，导致 GH 与 GHR 的结合力下降，从而影响 GH 生理效应的正常发挥（Ross，1999）；性连锁矮小鸡 的生长迟缓症状也是因为其 GHR 基因异常，导致组织中 GHR 数量显著减少甚至缺乏所致 （Tanaka et al.,1995）。 国内外学者对鱼类生长轴的相关内容做了许多研究工作,迄今为止，已经克隆出了草鱼 (Ctenopharyngodon idella)、莫桑比克罗非鱼（Oreochromis mossambicus ）、大西洋鲑（Salmo 本课题得到教育部高等学校博士学科点专项科研基金(No. 20040558012)，广东省科技计划项 目（No.2004），珠海市科技计划项目（No.P）资助. 1 salar ）、黑鲷（Acanthopagrus schlegelii ）、斜带石斑鱼（Epinephelus coioides ）等40 多种鱼 类的 GH 。在同一目的鱼类中，GH 的氨基酸组成约有 80% 以上的同源性，不同目的鱼类只 有 38%–68%的同源性。Lee et al.(2001)首次报道了硬骨鱼类金鱼(Carassius auratus) 的GHR cDNA 序列，到目前为止已有数十种鱼的 GHR 得以克隆，包括黑鲷 (Tse