激光扫描共聚焦显微术在生物医学中的研究.pdfVIP

《生命的化学》!# 年!# 卷# 期 ·!## · !技术与方法 $%’()*+, -. /(. !# ，!#（# ） 0 0 文章编号：121##3 （!# ）#2!##2# 激光扫描共聚焦显微术在生物医学中的研究 闫0 炀 （西安交通大学医学院，西安4 131 ） 摘要：激光扫描共聚焦显微技术的发展，为形态学、分子细胞生物学、神经科学、肿瘤医学、药理学、遗传学等领域的 研究提供了新的先进研究方法和手段。本文对激光扫描共聚焦显微术在粘附细胞分选，动态荧光分析测定，显微细 胞外科和光陷阱技术，荧光光漂白恢复技术以及三维图像重建功能等方面的研究进展进行了综述。 关键词：激光；激光扫描共聚焦显微术；生物医学 中图分类号： *5!67 ；8!46 0 0 激光扫描共聚焦显微镜 （/:;= ):??@?A $B?CB2 选细胞之外的非选细胞予以除去，适用于分选数量 :D ’@=B;BE ，简称/)$’ ）是! 世纪F 年代发展 较少的突变细胞、转移细胞和杂交细胞。采用/)$’ 起来的一种激光显微光谱分析技术。是当今世界上 技术已成功地对粘附生长的 2半乳糖苷酶表达阳 ! 先进的分子细胞生物学仪器，它是以激光、光学显微 性细胞进行了分选［# ］。以 L 9 MMBDN / .GO（2半乳 ! 镜与光电器件（如电感耦合器件， $$G ）及计算机数 糖苷荧光素）对#*# 细胞贴壁培养、染色，进入细胞 字图像处理功能相结合的高精度仪器系统，为获得 的.GO 被 2半乳糖苷酶（2A:D ）表达阴性的细胞中 ! ! 细胞或组织内部微细结构图像，观察生物活细胞及 的 2半乳糖苷酶水解后，释放出荧光素。按预先设 ! 特定分子、离子的生物学变化提供了一种新的分析 定一定“切割”程序沿 2A:D 细胞周边介质进行正八 ! 方法和手段。广泛应用于分子细胞生物学，形态学， 角形切割，而非选择细胞系在该几何形态之外则被 神经学，药学，遗传学以及化学、材料科学等研究领 除去。除此之外，亦可选择激光消融方法，即采用高 域。可对活的或固定的细胞及组织无损伤的进行 能量激光杀灭特异性荧光标记的阳性细胞，进行细 “光学切片”；进行单标记或双标记细胞及组织标本 胞分选。 的共聚焦荧光定性、定量分析；用于活细胞生理信号 细胞分选方式特别适用于分选和克隆诸如基因 的动态监测以及细胞内离子含量及其动态变化的实 重组，基因突变细胞核杂交瘤细胞等，即使对以百万 时分析测定，粘性细胞分选，激光细胞显微外科操作 分之一几率发生的突变细胞也可获得理想的分选结 和光陷阱技术以及荧光光漂白恢复技术，光活化技 果。粘附细胞分选方法目前多用于对杂交瘤核突变 术［1，! ］。 细胞的分选，亦有用于对经转化的平滑肌细胞、鼠卵 ! 激光扫描共聚焦显微术在粘附细胞分选中的应 巢癌细胞及人畸胎瘤细胞等的分选和克隆，还可用 用