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维普资讯 74 现代检验医学杂志 第 zz卷 第 6期 2007年 l1月 JModLabMed，Vo1．22，No．6，Nov．2007 HLA分型B位点常见的模棱两可样本的分析及解决策略 刘孟黎，刘 晟，张 艳，沈春梅 (陕西省血液中心，西安 710061) 中图分类号：Q781 文献标志码 ：A 文章编号：1671—7414(2007)06—074—02 异基 因造血干细胞要求供者和受者 HLA抗 只有245个 ，占29．596／；HIA—DRB1的463个等位 原最大程度 的匹配，由于 HIA 的高度复杂性、多 表1 668例模棱两可样本的分析确认 态性和多样性等遗传特点[1]，尽管方法和试剂不断 改进，在进行常规 的HLA分型中除了会得到中分 辨甚至高分辨的结果，还常常会得到很多种组合结 果。这样以来虽然可能的结果都会被报告 ，但模棱 两可的样本大大增加了，造成一些样本无法确认结 果。最常见的情况是两组 以上的基因型组合得到的 基 因型和血清学特异性结果不一致 ，尤其是 B位 点。HLA—B是最具有多态性的位点，也是出现模棱 两可或难以判定的结果最多的位点 ，下面是笔者在 中华骨髓库陕西分库捐献者样本的 日常分型中对 668例HLA—B位点的模棱两可样本的分析和处理 对策。 1 材料和方法 1．1 样本来源 668例样本来 自陕西分库的志愿 捐献者 ，在常规的PCR—SSO低分辨中B位点出现 模棱两可结果。 1．2 试剂 基 因组DNA抽提试剂盒 (天根生化， 国产 )，PCR—SSO 试 剂 盒 (OneLambda Inc， USA)，PCR—SSP低分辨和高分辨试剂 盒 (Pel— Freez，USA；GT，USA；Protrance，Germany等公 司)。 1．3 仪 器 Luminex100IS 流式仪 ，美 国产； PCR仪 (PE9700，MJ—PTC225)，美国产 ；凝胶成像 系统 ，上海产 。 2 结果与讨论 668例 30种模棱两可的情况 (见 表 1)，分别采用根据频率、用另一种试剂、增补板 注 ：括号里的 4位数为造成模棱两可的等位基 因型 。 和高分辨等方法确认这些模棱两可样本的低分辨 基因中，CWD基 因只有 143个，占30．5 L3]。随着 结果 。需要说明的是 ，表中所列情况5例的我们 Luminex微磁珠 PCR～SSO技术的广泛使用 ，以及 无论是采用哪种方法确认，实验全部做；5例的 试剂的不断完善，漏检的可能逐渐减少。但随之而 随机做 5～10例确认实验，其它样本参照确认实验 来的是会得到很多种组合的结果 ，模棱两可的几率 样本报告结果。 增大 ，尤其是当血清学特异性不一致或空 白的时 2．1 根据频率分析确认 至 2007年 4月 wHO 候。我们发现造成模棱两可状况的总有一些是人群 认可的HLA等位基 因(HLA—I和 HLA一Ⅱ)共有 中非常罕见的等位基因，罕见等位基因在人群中的 2714 个 ，在这些等位基 因中仅有 30％为常见和 分布频率很低 ，有的甚至只报道过一例，依据 HLA 确认 的HLA 等位基 因 (commonandwell-docu— 字典和 CWD等位基因表l_3刈，我们可以排除罕见 mentedallele，简称CWD)。有研究报道HLA-A 的 基 因得出的结果。比如下列两种情况：①B* 489个等位基 因中，CWD基 因只有 130个，占 070201／044801／o9／11；Bo2。根据 26．5o,4；HLA—B的830个等位基 因中，CWD基 因 HLA字典和 CWD等位基 因表 B*4808非常罕见 作者简介 ：刘孟黎(1957一)，女，副主任技师，主要从事输血免疫研究 。E—mail：annmengli@yahoo．2om．cn。 维普资讯 现代检验医学杂志 第22卷 第 6期 2007年 l1月 JModLabMed，Vo1．