硒增强细胞免疫的研究——Ⅲ. 硒通过增强抗原递呈促进迟发超敏反应34492.docVIP

硒增强细胞免疫的研究 Ⅲ。硒通过增强抗原递呈促进迟发超敏反应 夏汉章 张友会 （肿瘤研究所，北京） 提要 硒处理小鼠能提高小鼠对致敏剂三硝基氯苯（TNCB）诱发的迟发超敏反应（DTH）的敏感性。体外实验证明，经硒处理的小鼠脾脏粘附细胞向TNCB致敏的T淋巴细胞递呈半抗原三硝基苯基进而刺激T细胞增殖反应的能力。即抗原递呈功能比未处理的对照强。正常小鼠的脾脏粘附细胞在体外经硒处理后，其递呈抗原的能力更强。提示硒通过加强抗原递呈细胞的功能实现促进DTH反应。 关键词 迟发超敏反应 抗原递呈 硒 自然界硒分布和机体血硒含量与人类某些肿瘤的发生率成负相关关系[1]，硒可抑制某些化学致癌物的致癌效应[2]。免疫系统的功能与硒的含量相关，多数研究表明，硒可促进机体的体液免疫反应[3，4]，但有关硒对细胞免疫之影响的报道为数不多。Spallholz[5]曾报道硒处理豚鼠可提高动物对二硝基氯苯（DNCB）刺激的迟发超敏反应的敏感性。硒不仅能促进T细胞的功能，如细胞毒T细胞的活性[6]、白细胞介素2的分泌[7]，也能促进巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤效应[8]，消除抑制性巨噬细胞的抑制功能[9]。本文报道硒通过增强抗原递呈细胞活性从而加强小鼠的迟发超敏反应。 材料与方法 动物 健康BALB/c小鼠，2-3月龄，由中国医学科学院动物中心或肿瘤研究所动物室提供。 试剂 RPMI1640（GIBCO）培养液含青霉素100u/ml，链霉素100u/ml，小牛血清10%。临用时加新配制的2-巯基乙醇（Sigma）5×10-5mol/L。致敏剂1，3，5-三硝基氯苯（TNBS，Sigma），用磷酸缓冲液（PBS）配成10mmol/L的溶液，并用1NnaOH调酸碱度至pH7.4，-20℃保存。亚硒酸钠（Na2SeO3）购于北京化工厂。氚-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR，比活性25Ci/mmol），购于中国科学院原子能研究所。 迟发超敏反应 取0.2ml 7%TNCB，涂在剪除毛发的小鼠腹部皮肤上，使动物致敏。4d后，在动物左耳壳涂1%TNCB刺激。24h后测量动物左右耳壳的厚度差，来表示迟发超敏反应的强度。对照为未致敏小鼠耳壳厚度差。 抗原特异性T淋巴细胞增殖反应 半抗原三硝基苯基（TNP）刺激的T细胞增殖反应的实验方法见文献[10]。用液闪仪（Beckman）测量样品每分钟脉冲数(cpm)。结果用三个重复孔cpm的均值表达。 结 果 图1示硒对迟发超敏反应（DTH）的影响。以未致敏的小鼠对三硝基氯苯（TNCB）的刺激为对照，四天前经TNCB致敏的小鼠能对TNCB的再刺激产生较强的DTH反应。如果在致敏的同时经腹腔注射Na2SeO3 (1mg/kg)，小鼠对TNCB刺激的DTH反应明显增强，提示硒提高了动物对致敏剂的敏感性。 图2示硒对抗原特异性T淋巴细胞增殖反应的影响。结合半抗原三硝基苯基（TNP）的小鼠脾脏粘附细胞（SAC）能刺激TNCB致敏小鼠的淋巴结T细胞（LNT）活化，产生强烈的增殖反应，而未结合TNP的SAC只引起LNT轻度增殖。此外如前文所述[10]，SAC-TNP不能刺激TNCB非致敏的LNT产生增殖反应，而结合TNP的脾脏非粘附细胞（SNAC）也只能刺激LNT产生微弱的增殖反应。提示SAC在该实验系统中实际起着递呈抗原的作用。 25 SAC SAC-TNP 20 60 15 50 40 10 30 20 5 10 6 0 图1 TNCB诱导的迟发超敏反应 Fig 1 Delayed type hypersensitivity in mouse skininduced by TNCB 从图2可知，TNP特异性T细胞增殖反应可因Na2SeO3的加入而改变，其程度取决于Na2SeO3的剂量。适量的Na2SeO3能促进TNP特异的增殖反应，当浓度为50ng/ml时，硒可使增殖反应提高85%。Na2SeO3浓度过高（500ng/ml）TNP特异性T细胞增殖反应反而被强烈地抑制。 为研究硒在适量的浓度范围内促进DTH和抗原特异性T细胞增殖反应的机理，实验观察硒对脾脏粘附细胞抗原递呈功能的影响。给小鼠腹腔注射Na2SeO3（1mg/kg），以未处理的小鼠作对照，4d后制备小鼠SAC并与TNP结合。结果表明，在图3所示的S/R比值范围内，经硒处理的小鼠SAC向TNCB致敏的LNT递呈TNP的能力比正常小鼠的SAC强，引起LNT较强烈的增殖反