低表达Adipophilin减少细胞内脂质机制研究.pdf

低表达Adipophilin减少细胞内脂质的机制研究 研究生： 刘晓辉 导 师： 袁中华教授 专 业： 病理学与病理生理学 中文摘要 该环节是否涉及PKC信号通路。阐明adipophilin引起细胞内脂质变化的机制。 方法：构建pSuper-retro．adipophilin retro．scramble 将质粒用梭华．Sofast基因转染试剂转染PA317包装细胞4个小时，获得逆转录病毒。 RAW264．7细胞株。 应用RT．PCR和Western Blot检测经各种病毒感染后细胞内adipophilin的表达， 以确定是否成功构建稳定低表达adipophilin的细胞株。使用油红O染色观察细胞内 脂质含量的变化。应用RT—PCR和WestemBlot检测细胞内ACATl表达的变化。同 时，使用无血清培养基阻断外源性胆固醇，使用Atorvastatin阻断内源性胆固醇，即 进一步应用PKC抑制剂Calphostin 表达的改变。 结果：酶切结果显示pSuper-retro-adipophilin siRNA逆转录病毒载体构建成功。转染PA317细胞后，收集病毒，用病毒感染 Blot检测，细胞中 mRNA和蛋白表达明显降低。 adipophilin siRNA组细胞内脂滴减少，空白及阴性对照组无明 油红0染色显示，adipophilin siRNA组ACATImRNA和蛋白的表达明显下调，阴性对照 显变化。adipophilin scramble sil斟A感染组ACATlmRNA和蛋白的表达下降不明显，空白对照组的表达 C共孵育16h之后，经RT-PCR和WesternBlot检测发现ACATl PKC抑制剂Calphostin 表达明显降低。 siRNA逆转录病毒载体，并获得稳定低 结论：成功构建pSuper-retro．adipophilin 程中可能涉及PKC信号途径。 siRNA：逆 关键词：adipophilin；乙酰辅酶A：胆固醇酰基转移酶；蛋白激酶C； 转录病毒；脂质 2 MechanismofLow cellular Adipophilinreducinglipid Abstract whether affectsthe ofACATlmediated objeetive：Toexplore adipophilin expression by PKC andilluminatethe mechanismmediated signalpathway lipid—accumulation by thecreationofaRAW264．7celllinelow adipophilinthrough expressionadipophilingene， andthentoclarificatethemechanismofthe of contentinRAW264．7cells try change