抗菌肽CM与haFGF改构体融合基因构建与表达.pdfVIP

( ) 吉林农业大学学报 　2009 ,31 4 :402～406 ,4 15 http :/ / x uebao. j lau . edu . cn J ournal of J ilin A gricultural University Email :j lndxb @vip . sina . com 抗菌肽 CM 与 ha F GF 改构体融合基因的构建 与表达 1 2 2 2 3 方方2 解佳森 , 肖业臣 , 秦玉侠 , 王会岩 , 张继威 , 李校土 　 1. 吉林农业大学生命科学学院 , 长春 130118 ; 2 . 生物反应器与药物开发教育部工程研究中心 , 长春 130118 ; 3 . 吉林农业大学中药材学院 , 长春 130118 摘 　要 : 构建重组改构体 aFGF28154 和抗菌肽 CM 基因的融合基因 ,使其在大肠杆菌系统中融合表达 , 以期获得 具有靶向 FGFR 高表达肿瘤细胞的抗肿瘤融合蛋白。利用 PCR 引物延伸的方法拼接得到带有 G S 铰链的天 4 蚕素 —蜂毒素杂合肽 CM 与 aFGF 的融合基因 ,插入大肠杆菌表达载体 p ET20b 中 ,构建表达质粒 p ETCM 28154 ( ) aFGF28154 ,并转化至大肠杆菌 BL21 DE3 ,氨苄青霉素抗性筛选重组转化子 。IPTG 诱导 4 h 后 ,菌液经超声破 碎 , 以包涵体形式表达的融合蛋白约占菌体总蛋白的 18 % 。将包涵体溶解并通过差速离心除去部分杂蛋白, 透析复性并用 Heparin Sepharose CL6B 亲和层析 , 目的蛋白得到初步纯化 ,为进一步研究蛋白的生物学活性奠 定了基础 。 关键词 : 天蚕素 —蜂毒素杂合肽 CM ; 人酸性成纤维细胞生长因子改构体 aFGF28154 ; 融合基因 ( ) 中图分类号 : Q786 　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : 2009 Construction and Expression of Fusion Gene of Antibacterial Peptide CM and Modif ied ha F GF XIE J iasen 1 , XIAO Yechen2 , QIN Yuxia2 , WAN G Huiyan2 , ZHAN G J iw ei3 , LI Xiaokun2 1. College of L fi e Science , J ilin A gricultural University , Changchun 130118 , China ; 2. Ministry of Edu cation , Engineering Research Center of B ioreactor and Pharmaceutical Develop ment , Changchun 130118 , China