冷冻干燥对长双歧杆菌损伤作用的研究.pdfVIP

维普资讯 FOODANDFERMENTATIONINDUSTRIE 冷冻干燥对长双歧杆菌损伤作用的研究 刘丽凤 ，孟祥晨 (东北农业大学乳 品科学教育部重点实验室 ／食 品学院，黑龙江哈尔滨 ，150030) 摘 要 冷冻干燥是 乳酸 菌和益生菌干燥的主要方式 ，冷 冻和干燥 2个 过程都会 影响菌体 细胞的存 活率，探 讨 冷冻和干燥过程对长双歧杆菌的损伤作用有利于指导高存活性益生菌粉 的生产 。采用透射 电镜观察菌体在冷 冻干燥过程 中的微结构，通过溢 出胞外的B一半乳糖苷酶活性评价冷冻和干燥后细胞膜通透性的变化，通过测定 冷冻和干燥后胞 内Na 和 K 浓度的变化研究离子效应的影响。研究结果表 明，长双歧杆菌在冷冻干燥过程 中 的形态、细胞膜通透性和胞 内离子浓度变化程度 随冻结时间的延长而加剧；冷冻干燥过程使菌体 出现细胞质浓 缩、质壁分离、菌体皱缩 以及破损现象 ；冷冻干燥使细胞膜通透性增大 ，使胞 内Na 、K 浓度显著下 降，并伴 随比 例失调。 关键词 冷冻干燥 ，长双歧杆菌，损伤 冷冻干燥过程 中，干燥温度低 ，是一种有效 的稳 长双歧杆菌在 TPY培养基 中于 37℃条件下厌 定益生菌粉的制备方法。冷冻干燥所采用的条件 比 氧培养 ，连续活化 2～3代 ，使之于 16～22h达对数 喷雾干燥温和，因此菌体可以获得较高的存活率 ]。 生长期 。 虽然冷冻干燥过程对细胞的影响削弱 ，但该过程 1．3．2 不 同冻结时间的双歧杆 菌冻干后微结构的透 仍会导致大量菌体细胞死亡，尤其双歧杆菌对该过程 射 电镜观察 更为敏感，乳杆菌在冷冻干燥过程中有比较好的存活 1．3．2．1 双歧杆菌的冻结和冷冻干燥处理 性 ，有时能获得高达 8O 的存活性l2；而部分双歧杆 双歧杆菌在 TPY 培养基 中 37℃厌氧培养至对 菌在冷冻干燥过程中的存 活率 只有 1O 左右 ]，这 数生长期，取出于 4℃条件下 6000g离心 30min收 主要是 由于冷冻干燥过程 中形成的冰 晶对细胞膜造 集菌体 ，离心收集的菌体每 0．2g悬浮于 5mL灭菌 成损伤 以及渗透压胁迫造成 的。本研究从冻结和冻 后的生理盐水 中，混匀后以每瓶 1mL的量将菌体悬 干过程长双歧杆菌的超微结构 、细胞膜通透性、离子 浮液分装至安瓿瓶 中，然后放入 一2O℃的冰箱 中冻 效应 3方面研究了冷冻干燥过程对双歧杆菌的损伤 结 ，冻结时间分别为：3h、4h、6h、8h和 12h。冻结 作用 。 结束后 ，立即放入冻干机 中冷冻干燥 ，条件为 ：搁板温 度一4O℃，干燥压力 10Pa，干燥温度 2O℃。 1 材料与方法 1．3．2．2 不同冻结时间的双歧杆菌冻干后微结构的 1．1 菌 种 透射 电镜观察 长双歧杆菌 (Bifidobacteriumlongum ，BL)，为 (1)前固定 ：将 样品用 2 琼脂溶 液包埋 ，加入 东北农业大学乳品科学教育部重点实验室保藏 ，经多 2．5 的 pH7．2戊二醛进行前固定 ，并置于 40C冰箱 次传代遗传性状稳定 。 中保存 。(2)冲洗 ：用 pH 7．2磷酸盐缓 冲液 冲洗 3 1．2 仪器与设备 次 ，每次 10min。(3)后固定 ：用 2 四氧化锇 固定 2 厌氧培养箱 ；低温高速离心机 (Beckman