伊氏锥虫微管结合蛋白p15基因的分子克隆与表达.pdfVIP

维普资讯 第 14卷 第 4期 寄生虫与医学 昆虫学报 V01．14．No．4 2007年 12月 ActaParasito1．Med．Entomo1．Sin． Dec．，2007 伊氏锥虫微管结合蛋 白p15基因的 分子克隆与表达* 张广州 索 勋 侯丽丽 (中国农业大学动物医学院，北京 100094) 摘要 根据报道 的布 氏锥虫 (Trypanosomabrucei)微管结合蛋 白p15(Tb—MAPp15)基 因及其 3非翻译区保 守序列设计引物 ，采用 PCR法从伊 氏锥虫云南水牛株 (TrypanosomaevansistockYNB)基 因组 DNA中克隆得 到伊 氏锥虫微管结合蛋 白p15 (Te—MAPp15)基 因。克隆片段长 273bp，编码 9O个氨基酸 ，预测分子量 9．0 kDa。经 同源性 比较 ，所得基 因与 Tb—MAPp15基因同源率达到 94％。抗原性分析 Te—MAPp15基 因表达的氨 基酸序列比 T．brucei微管结合蛋 白p15多 5个 ，均参与组成其 中 1个抗原决定簇 ，并且此抗原决定簇序列 形成在蛋 白中常作为识别位点的a螺旋。将该基 因亚克隆到 pGEX一6P一1原核表达载体 ，转化大肠杆菌 ． coliRS21宿主菌，经 IPTG诱导，可成功表达 。重组融合蛋 白大小为35kDa，与预期大小一致 ，经 SDS—PAGE 和 Western—blot鉴定为重组伊 氏锥虫微管结合 p15蛋 白。 关键词 伊 氏锥虫；微管结合蛋 白p15；pGEX-6p1；原核表达 ；RS21大肠杆菌 伊氏锥虫病亦称苏拉病 (Surra)，是 由伊 氏 目前为止都没有针对所有这些 VAT的疫苗成功。 锥虫 (Trypanosorrvaevartsi)寄生在马属动物、牛 、 所以，鉴定锥虫独有的非变异成分作为疫苗用抗 骆驼等家畜血液内引起 的一种血液原虫病 ，主要 原是当前锥虫疫苗研究的另一大焦点 (Mkunzaet 由吸血昆虫传播。伊氏锥虫在我国分布甚广 ，主 ． ， 1995；DaltonandMulcahy，2001)。 要流行于华东 、华 中、华南 、西南和 西北等地 研究表明锥虫的非特异性成分——膜下微管 区，尤其南方各省流行相当严重 ，造成大批家畜 可以作为特殊非变异靶位用于治疗 (Balabanet 死亡 ，对畜牧业造成较大危害 (王祥生 ，2000)。 Ⅱz．，1995)，用布氏锥虫 (T．brucei)的一种微 目前控制锥虫病 的有效方法主要是药物 治 管结合蛋 白Tb—MAPp15免疫动物 ，获得 了很好 疗 ，但长期用药导致锥虫产生抗药性问题 日趋严 的保护效果 (RasoolyandBalaban，2004)。由于 重 ，而且研制开发一种新的抗锥虫药需要较长的 T．evansi从 T．brucei进化而来 (Hoare，1972)， 周期 ，很 高的费用 (Boideta1．，1989；Zhouet 该类蛋白可能对 T．evallsi免疫有效 ，因此本实 oz．，2004)，这些因素大大制约了对锥虫病 的防 验根据 已发表的Tb—MAPp15基 因和 3非翻译 区 治。研制疫苗预防锥虫病成为一种趋势 ，然而由 的保 守序 列 设 计 引 物 (RasoolyandBalaban， 于锥虫可以通过 自身的抗原变异逃避宿主的免疫 2040)，用 PCR法扩增 Te—MAPp15基因，构建重 保护 ，使得 已研究过 的疫苗 (包括基因工程苗) 组原核表达载体 ，得到重组蛋白，以期下一步研 (Pandavoin