下丘脑室旁核经迷走复合体对哮喘大鼠神经调控的研究.pdfVIP

下丘脑室旁核经迷走复合体对哮喘大鼠 的神经调控研究 肖剑 董榕 刘佳 刘伲娜 （东南大学基础医学院 生理教研室，江苏 南京 210009） E-mail:jax709seu@ 摘 要 探讨下丘脑室旁核对哮喘大鼠的神经调控途径,取健康雄性 SD 大鼠制备哮喘模型并 诱发哮喘发作，运用 WGA-HRP逆行追踪法与免疫组织化学染色法(ABC法)相结合的双重标记 方法，在光镜下观察投射到迷走复合体(DVC)的下丘脑室旁核(PVN)内神经元表达 Fos 的情 况。光镜下发现 PVN内出现三种阳性细胞，即 HRP反应阳性细胞、Fos样免疫反应阳性细胞 和 HRP/Fos双重反应阳性细胞，这些细胞主要见于 PVN小细胞部的内侧亚核和外侧亚核，散 在分布于背侧亚核，前小细胞亚核未见阳性细胞；Fos样免疫反应阳性细胞呈双侧分布，而 HRP 反应阳性细胞，HRP/Fos 双重反应阳性细胞也为双侧分布但以注射区同侧占优势。 HRP/Fos双重反应阳性细胞数与 HRP阳性细胞数的所占百分比为 44.22%。本研究提示，哮喘 大鼠发作时，中枢内包括下丘脑室旁核、延髓迷走复合体的多个脑区内神经元兴奋，并有其 联系途径，即下丘脑室旁核通过与延髓迷走复合体的直接投射参与哮喘的调控。 关键词 大鼠 哮喘 下丘脑室旁核 迷走复合体 WGA-HRP 中图分类号 R562. 25 R338.27 支气管哮喘是一种常见的慢性气道炎症性疾病,发病机制非常复杂。目前研究多集中于 局部因素对气道炎症的影响机制，近五年来研究发现中枢神经系统在哮喘发作中发挥着重要 作用[1]，已有报道指出：位于气道的感受器受到气道炎性介质的直接或间接刺激，可引发局 部组织反应，在气道产生神经源性炎症，同时产生的冲动沿迷走神经传入纤维经结状神经节， 传递至延髓的孤束核(nucleus tractus solitarius,NTS)，通过神经反射，引起支气管平滑肌痉挛、 气道粘膜水肿、粘液分泌亢进等变化，从而加重哮喘症状[2] 。可见对哮喘的神经反射性调控 的研究主要在传入神经通路方面，而对传出调控途径的研究不多。 下 丘脑室旁核 (hypothalamic paraventricular nucleus,PVN)是下丘脑前区最显著的核团之一,是调节多种内脏 活动的较高级中枢，对哮喘发作有着调节作用，但其神经调控机制尚不清楚，国内外亦未见 文献报道。因此本文以WGA-HRP逆行追踪法与免疫组织化学染色法(ABC法)相结合的双重 标记方法，旨在研究下丘脑室旁核调控哮喘大鼠发作的神经机制。 材料与方法 1. 动物与分组 健康雄性成年SD大鼠64只,体重250～350g, 由东南大学医学院实验动物中心提供,在安 静、温暖(18～25 ℃) 、避强光、昼夜光照节律（明暗周期为10/14h）的实验室预饲养1周，自 1 由饮水和摄食。 大鼠随机分成两大组，第1组：应用SABC法行Fos免疫组化反应；又分为①正常对照组 (n=8)，大鼠在上述环境下饲养48h ，不行任何手术；②假手术对照组(n=8)，大鼠在致敏、吸 入激发和静脉激发阶段及手术只进行操作，不涉及任何药物。③生理盐水对照组(NS对照 组,n=8)，大鼠在致敏、吸入激发和静脉激发阶段均以NS代替卵蛋白(OVA)混悬液。④哮喘 组(n=32) 分为四组(每组8只) ：哮喘激发后30min组、60min组、90min组、120min组，观察 Fos表达规律。(2)第2组(n=8)：行WGA-HRP逆行标记结合Fos免疫组化双重标记法。 2. 制备哮喘大鼠模型： 根据Elwood[3] 的方法，每只模型大鼠腹腔注射用卵蛋白100mg、氢氧化铝100mg、灭活 9个配成的混悬液1ml/次,两周后用超声雾化器给大鼠雾化吸入1%OVA生 的百日咳杆菌5 ×10 理盐水溶液(2~3ml ·min-1,颗粒直径≤5 μm),每天1次,每次20min ，连续雾化3