激光捕获显微切割技术在肿瘤分子病理学中的应用原理及的研究进展.pdfVIP

维普资讯 1970 GuangxiMedicalJournal，Dec2005，Vo1．27，No．12 激光捕获显微切割技术在肿瘤分子病理学中的应用原理及研究进展 ▲ 广西医科大学病理教研室 (南宁 530021) 王 -R 冯震博 组织发生、分化以及病理改变是多基因调控的复杂过程。 性地转移 目标细胞。激光脉冲通常持续0．5～5．0n-is，并可在 要在基因水平了解其机制，就必须准确深入地分析特定细胞 整个塑料帽表面进行多次重复，从而能迅速分离大量的 目标 基因结构和表达的动态变化。为了阐明在肿瘤发生和发展不 细胞。将塑料帽盖在装有缓冲液的离心管上，把所选择的细 同阶段如不典型增生、原位癌、浸润癌及转移癌发生时特定细 胞转移至离心管中，而分离出感兴趣 的分子进行实验 6J。由 胞内的分子生物学改变 ，以及前一阶段向后一阶段进展时，其 于整个操作过程是在计算机控制下完成的，故操作简便，定位 关键的分子生物学改变是什么等重要信息，需要获得单一的 准确，切割 1--30个细胞所需时间一般不到 10s。 同类细胞群。组织是多种细胞群体相互作用的三维空间结 2 LCM 的优点与技术限制 构，但以往的各种技术所获得的细胞 ，其 内既有肿瘤细胞 ，又 多少不等地含有一些其他细胞。同时，体外培养的细胞系虽 2．1 优点 LCM与传统分离方法 比较，具有 以下优点：①快 能解决组织异质性问题，但其培养环境与组织内环境有一定 速简便：无须手工操作，可通过计算机控制一步完成；②定位 差距，因此，无法真实反映在体内复杂环境下生长的肿瘤细胞 准确 ：能够结合组织细胞的表型结构特点与功能特征，以及所 具有的各种特性。组织细胞异质性已成为肿瘤基因组学研究 需的切割精确度，通过选择激光柬的直径大小来进行特定分 的一大障碍…。而激光捕获显微切割技术(Lasercapturemi— 离 ；③捕获标本无组织型限制：存档石蜡包埋组织、冰冻组织、 crodissection，LCM)是一项在显微镜直视下从组织切片中确 细胞涂片、各种固定剂 固定、HE染色或不染色的组织切片 定、分离、纯化单一类型细胞群或单个细胞的技术，它成功解 均可有效捕获；④有效减少交叉污染 ：转运膜的使用避免了常 决了细胞异质性问题 2【,3J，是肿瘤基因组学研究的一项革命性 规显微切割造成的碎屑污染 ，这对基于PCR的分析特别重 技术。 要 ；⑤捕获的目标细胞与热塑膜结合紧密，减少了组织损失的 风险；⑥保持被分离样本结构完整性 ：在捕获过程中所经历温 1 LCM简介 和短促的热变换不会对捕获组织的DNA、RNA和蛋白质甚至 1．1 L(、I 的基本原理 通过一低能红外激光脉冲激活热塑 酶活性造成影响，被捕获细胞的形态学特征几乎不受影响，且 膜一乙烯乙酸乙烯酯(ethylenevlnylacetate，E、，A)膜(其最大吸 可在显微镜下验证捕获组织的正确性，而周围邻近组织完整 收峰接近红外激光波长)，在直视下选择性地将 目标细胞或组 性也不受破坏 引。 织碎片粘到该膜上 J。用于捕获细胞的EVA膜直径通常为6 2．2 技术限制 尽管 LCM可广泛应用于细胞或组织分离， inln，厚约 100～200tan，含有吸收近红外激光波长 的特殊染 但仍存在以下技术限制：①虽然LCM可获得用于不同分子分 料，而不吸收显微镜所使用的可见光。故其能够吸收与其所 析技术所需的几乎纯净的细胞 ，但是捕获大量组织仍需要较 能特异吸收的波长相一致的激光束产生的绝大部分能量，在 长的时间消耗，且 LCM仪器及其消耗品价格较昂贵；②用于 瞬间将激光束照射区域的温度提高到 90。C，保持数毫秒后又 显微切割的组