苦丁茶多糖提取分离纯化及部分理化性质的研究.pdfVIP

维普资讯 苦丁茶多糖的提取分离纯化及部分理化性质研究 吴晓鹏 ，王一飞 ，刘秋英 ，郝 静 ，杨 珂 ，罗 勇 ，贺震旦 1(暨南大学生物医药研究开发基地 ，广东广州 ，510632) 2(重生源生物科技 (深圳)有 限公司，广东深圳 ，518057) 摘 要 以多糖提取率为指标 ，采用单 因素实验和正交实验对苦丁茶 多糖的提取工艺条件进行优化，确定最佳 提取工艺为 ：水料 比2O：1、80~C、提取 50min。在此条件下，苦丁茶多糖提取率为 2．43 ，先后采用 Sevag法脱 蛋 白、分级醇沉法、DEAE一52纤维素离子交换柱层析法对其进行分离纯化 ，最后得到 K 和 Kz2个组分 。同时 对各苦丁茶多糖进行理化性质分析 ，结合Sevag法预实验所得 出的结果，推测苦丁茶多糖可能为 以某种方式结 合蛋 白的糖缀合物 。 关键词 苦丁茶 ，多糖，提取工艺 ，分离纯化 ，理化性质 苦丁茶是我国南方各 民族经常饮用的植物代用 合并滤液 ，加热浓缩至体积 的 1／4— 用 95 的乙醇沉 茶 ，主要含有三萜皂苷及甾醇、茶多酚、黄酮 、生物碱、 淀 多糖 一用 乙醚一丙酮一无水 乙醇溶剂 系统反复冲洗 氨基酸、维生素 、苦味素和对人体有益的多种微量元 一真空低 温干燥一苦丁茶粗 多糖样品。 素 。试验采用在广东、广西、海南等广为种植 的冬 1．3．2 苦丁茶多糖含量测定 青科冬青属苦丁茶 (IcexkudingchaC．J．Tseng) ， 多糖含量测定 ：苯酚一硫酸法[33。以葡萄糖为标 从 中提取分离多糖 ，以多糖提取率为指标 ，采用正交 准单糖制作标准 曲线，得 回归方程为 ：Y一0．0154X 设计对提取工艺进行优化，找出最优工艺，并研究分 +0．0038，R 一0．9995，多糖浓度 (~tg／mL)为横坐 析苦丁茶多糖的部分理化性质 。 标 ，光密度值为纵坐标 。 样品含量测定 ：称取粗多糖样品 5mg，加蒸馏水 1 材料和方法 至 50mL，配成 100 g／mL的样品溶液 。吸取样 1．0 1．1 试验材料 mL，按标准曲线 同法操作 ，测光密度 ，以标准 曲线计 算总糖含量 。 苦丁茶购于广东省大埔县西岩茶叶集 团有 限公 苦丁茶 多糖提取率 ／ 一 司 ，经暨南生物医药研究基地工程师杨珂鉴定 ，为冬 青科冬青属苦丁茶 (IlexkudingchaC．J．Tseng)。 塑 苦慧丁茶原料禁质量(g) …～。 将茶叶原料磨碎 ，过 50目筛 ，置于干燥器中备用。 1．3．3 单因素实验 1．2 主要试剂与仪器 固定水料比为 20：1，8O℃提取 40rain，用 1、2、 苯酚 (分析纯重蒸馏试剂)，葡萄糖 ，浓 H SO ， 3、4、5倍 (体积)的 95 乙醇沉淀多糖 ；固定浸提温度 无水乙醇，三氯 甲烷 ，正丁醇 ，二乙胺基 乙基纤维素 80℃，提取 40rain，水料 比设 10：1、20：1、30：1、40 (DEAE一52，Whatman)等，均为分析纯试剂 。核酸蛋 ：1、50：1五个水平 ；固定水料 比为 20：1，提取 40 白分析仪 (DU一64O)，Beckman公司；电热恒温水槽 min，浸提温度设 5O、7O、8O、90、100℃五个水平 ；固定 (DK一8D型)，上海森信实验仪器有限公司；台式冷 水料比20：1，浸提温度 8O℃，提取 时间设 2O、3O、 冻离心机 (D-78532Tuttlingen，un