犬卵母细胞体外成熟影响因素.pdfVIP

维普资讯 第l8卷第5期 中 国 兽 医 学 报 Vo1．18， No．5 1998年 9月 Chinese Journa1 of Veterinary Science Sept． 1998 犬 卵母细细 胞胞体体外外 成成熟熟 的的影影 响响 因因素素 ) ．z S81q-． 盔 陈振文 任文陟 柬德光 崔宗虎 母连志 姜永和 窭—．． V (解放军农牧大学实验动物中心·长春130062) 摘要 采集发情期和问情期犬卵巢．回收大腔(直径太于1ram)卵泡和不可见卵泡的卵母细胞，在4种成熟 渡(TCM199+20 FCS．TCM199+2O FCS十10lU／mlFSH．TCM199+20 EDS和TCM199+20“EDS +10lU／m1FSH)中成熟后进行r受精试验。结果：(1)发情期大于2】【ul】和1～2mm的大腔卵泡卵母细胞 的体外成熟率(42．5 ．32．5 )显著高于问情期卵母细胞 (20．4 )．但发情犬不可见卵泡卵母细胞的体外成 熟率(28．9 )与问情期卵母细胞差异不显著；(2)在成熟液中舔加促性腺激素．能有效地提高卵母细胞成熟 率．不可见卵泡的卵母细胞对促性腺激素的依赖性(30．0 比7．8 )大于大腔卵泡的卵母细胞(42．5 比 29．0 )；(3)卵丘扩散与卵母细胞成熟存在相关性；(4)EDs可诱导卵丘扩敬．但不能有效提高卵母细胞的 成熟率；(5)发情期卵巢上的大腔卵泡和不可见卵泡的卵母细胞以及间情期卵巢不可见卵泡的卵母细胞体外 培养后．与休外获扼的精子进行体外受精，其卵裂率分别为16．O (4／25)，O (0t40)和2．5 (1／40) 关键词．基塑墨塑些． 壁 ．!圭兰 中图分类号 $814$829．2 犬是季节性单次发情动物，发情前期和发情 细胞所用的冲洗液为改良磷酸缓冲液(rapKS) 期长lI]，排卵时间不易掌握，难 获得 自然排出 1．2 卵母细胞成熟培养 以TCM199为基础培 的卵母细胞，使其体外受精和胚胎发育研究极为 养液，再分别添加不同成分配成A、B、c、D4种成 困难 研究表明，哺乳动物卵巢上的大腔卵母细 熟培养液：A．TCMl99+20 FCS；B．TCM199+ 胞、小腔卵母细胞R 和原始卵泡 都能完成体 2O FCS+10IU／mLFSH；C．TCM199+2O 发 外成熟和体外受精，而卵母细胞的质量对体外成 情犬血清 (EDS)；D．TCM199+20 EDS+10 熟有重要影响。本试验旨在探讨对犬卵母细胞体 IU／mLFSH 将收集的卵母细胞在成熟培养液中 ， 外成熟的影响因素，以完善其体外培养系统 洗涤3次，然后移人50m 培养微滴中(培养液用 石蜡油覆盖，并预先在cO 培养箱中平衡 l～3 1 材料与方法 h)，在37C、5 CO、饱和湿度下培养 72h。然后 用500IU／mL透明质酸处理 l5～20min，裸卵移 1．1 卵母细胞采集 从屠宰场取回成年健康犬 人 洁净的载玻片上，用缓冲体系固定液 (25 卵巢，根据犬宰前生理状况和卵巢特点，分为发情 mmol／LHepes，6Ommol／LPipes，10mmol／L 犬卵巢和问情期犬卵巢，在 1～2h内送实验室， EGTA，1mmol／LMgC12，2 甲醛和 0．04 用37C灭菌生理盐水充分冲洗。发情期卵巢，用 THtronX—100)固定 30nfin，最后 用 10mg／L 穿刺法回收直径大于 1mm卵泡中的卵丘卵母细 Hoechst33342(0．25mL