饲喂不同抗生素对肉牛废弃粪便中四环素耐药基因数量及持久性的影响.pdfVIP

中国畜牧兽医 2012年第39卷第10期 动物营养与饲料科学 ·101· 饲喂不同抗生素对肉牛废弃粪便中四环素耐药基因 数量及持久性的影响 金鑫。张文广，张燕军，苏蕊，王瑞军，李金泉 (内蒙古农业大学动物科技学院，内蒙古呼和浩特010018) 摘要：通过对肉牛饲喂低于治疗水平的不同种类抗生素，研究其对肉牛废弃粪便微生物群落中四环素耐药基因数量与持 久性的影响。试验肉牛被分成不同抗生素处理组，即氯四环素组、氯四环素和磺胺甲嘧啶组及对照组。将每个围栏中所有动 和175天时采样并提取DNA，利用Real—time rRNA的浓度。结果显示，16srRNA的浓度在不同处理间相似，在56d内均有增加的趋势(PO．05)；总体上看，阳环素组的 耐药基因初始浓度较高(Po．05)；所有处理组的tet(B)和tet(c)浓度到56d时均增长了1～2个对数级，到175d时又降低 175 d，而某些基因的最初数量可能会导致错估其后的变化，其浓度的暂时改变并不能归因于微生物群落数量的变化。 关键词：肉牛粪便；四环素；耐药性基因 7236(2012)10—010卜04 中图分类号：s816．73 文献标识码：A 文章编号：1671 研究结果证明，源于家畜的耐药细菌可以被传 1材料与方法 递给人类(Barton等，2000)，因此能否找到有效的1．1试验设计与试验日粮90头未接受过任何抗 方法来控制耐药因子向周围环境的扩散，便显得愈 生素处理的肉牛被随机分入9个围栏中(每个围栏 加重要，而耐药细菌和耐药基因扩散传播过程中的 10头)，每3个围栏的动物为1组，按如下3种方式 一个至关重要的因素就是其持久性(Unc等，2004)。给药197d：①CT组，氯四环素，每千克体重44mg； 目前，关于养殖场粪便废弃物中耐药细菌持久性的 ②CT—S组，氯四环素和磺胺甲嘧啶，2种药物每千 研究主要集中在大规模的处理系统上，如在土壤或 克体重各44mg；③NT组，对照组，不饲喂任何抗 池塘中被用作肥料的情况(Ghosh等，2007；Schmitt生素。在此期间，所有试验动物的日粮均由85％的 等，2006)；而动物粪便在养殖场中的堆积同样会污干轧大麦全混合日粮，10％的大麦青贮及5％的矿 染周围的环境或水源(Schuster等，2005)，但来自于物质维生素添加剂组成。 这些方面的文献报道目前还比较少。 1．2样品采集与处理 同一围栏中收集肉牛的粪 由于耐药基因可以被连接到某些可转移的遗传 便并混合均匀，收集过程避免粪便与地面的接触。 因子上，所以给予单一种类的抗生素可能会产生具 每一份混合物被分为2份(共18份)装入容器中，以 避免各处理组之间的互相污染，每个容器底部都设 有多重耐药性的细菌(Gow等，2008)。另外，抗生 素的用药水平也会影响到某类耐药基因的流行 有排水孔。随后，这些样品被随机排序置于户外，并 (Blake等，2003)。因此，研究抗生素的使用对耐药 基因流行的影响对于了解整个农业生态系统中耐药 cm采集2份约15 因子的情况具有重要意义，而如今利用Real一time混合物相隔3 g的小样，混合均 PCR或DNA微阵列方法研究微生物耐药基因的存匀后，直接带到实验室。将每份样品称取5g于 在情况，已在畜牧生产的抗生素利用方面体现出了 105℃烘箱内放置24h以确定干物质含量。另外， 积极的辅助作用(Peak等，2007)。 将2份重复容器中采集到的样品各称取5g混匀后 冻干(每个处理组3份