第四章 DNA的生物合成.pptVIP

DNA复制的特点 一、 半保留复制 P514 半保留复制——DNA在复制时，以亲代DNA的每一条链为模板，按碱基互补原则，分别合成新链，每个子代DNA中都含有一条亲代DNA链。 实验证据——Meselson和Stahl实验 亲代DNA —— 15N标记 新合成DNA —— 14N标记 二、 复制的起始，方向与速度 DNA在复制时，需在特定的位点起始，这是一些具有特定核苷酸排列顺序的片段，即复制起始位点(origin) 。 复制起始位点序列特征：富含AT，具有复制起始蛋白识别的区域。 三、 半不连续复制 DNA聚合酶只能以5’→3’方向聚合子代DNA链，即模板DNA链的前进方向必须是3’→5’。 复制时，1条链的前进方向与复制叉打开方向是一致的，可连续合成，称为先导链(leading strand)，另一条链的前进方向与复制叉打开方向相反，不能连续复制，称为滞后链(lagging strand)。所以DNA的复制是半不连续复制。 滞后链的复制过程: 先以片段的形式合成冈崎片段，多个冈崎片段再连接成完整的链。 （一）、DNA聚合酶（DNA polymerase，DNA pol） 活性：1. 5??3? 的聚合酶活性 聚合反应： 底物－－dNTP 2. 核酸外切酶活性 DNA聚合酶的种类 在原核生物中，目前发现的DNA聚合酶有三种，DNA聚合酶Ⅰ（pol Ⅰ），DNA聚合酶Ⅱ（pol Ⅱ），DNA聚合酶Ⅲ（pol Ⅲ）。参与DNA复制的主要是pol Ⅲ和pol Ⅰ。 原核生物中的三种DNA聚合酶? pol Ⅰ可被特异的蛋白酶水解为两个片段，其中的大片段保留了两种酶活性,即5‘→3’聚合酶和3‘→5’外切酶活性，通常被称为Klenow 片段。 单链DNA结合蛋白是一些能够与单链DNA结合的蛋白质，以四聚体形式与单链DNA结合，起保持单链的存在的作用。 解链酶，又称解旋酶，解螺旋酶 ，是用于解开DNA双链的酶蛋白。 延模板链移动，每解开一对碱基，需消耗2分子ATP。 DNA连接酶(DNA ligase)可催化两段DNA片段之间磷酸二酯键的形成，把两段相邻的DNA链连接成一条完整的链。滞后链冈崎片段的连接。 第三节 DNA的复制的过程 一、复制的起始 DNA复制的起始由两步构成。 1．解旋解链，形成复制叉： A. DnaA蛋白识别复制起始序列，由拓扑异构酶和解链酶作用，使DNA双螺旋结构解开，形成两条单链DNA。 B. 单链DNA结合蛋白（SSB）四聚体结合在两条单链DNA上，形成复制叉。 2．引发体组装和引物合成： A. 由解链酶(DnaB蛋白) 等6个蛋白装配成引发前体，并与引发酶(DnaG蛋白) 形成引发体； B. 在引发酶的催化下，以DNA为模板，合成一段短的RNA片段作为引物，从而获得3端自由羟基（3-OH）。 二、复制的延长 复制的延长指在DNA聚合酶催化下，以亲代DNA链为模板，从5’→3’方向聚合形成子代DNA链。其化学本质是将dNMP逐个通过磷酸二酯键添加到子链3 ’末端羟基上。 在原核生物中，参与DNA复制延长的是DNA聚合酶Ⅲ；而在真核生物中是DNA聚合酶δ。 三、复制的终止 在复制过程中形成的RNA引物，需由RNA酶来水解去除； RNA引物水解后遗留的缺口，由DNA聚合酶Ⅰ（原核生物）或DNA聚合酶?（真核生物）催化延长缺口处的DNA，直到剩下最后一个磷酸酯键的缺口。 在DNA连接酶的催化下，生成最后一个磷酸酯键，将冈崎片段连接起来，形成完整的DNA长链。 四、环状DNA的复制过程 环状DNA复制有多种形式，比较常见的为?复制、滚环复制和D环复制。 ?复制是通过Colin实验发现的。其特点是：复制起始后双向复制，得到2个环状子代DNA分子。 Colin实验过程 滚环复制特点 （1）不需RNA引物 （2）只有一个复制叉，单向复制 （3）形成多联体（concatemer ） （4）一次起始可以合成多个子代DNA，效率高 采用滚环复制的DNA，大多为噬菌体DNA。 滚环复制的过程 D环复制(D-loop replication) ：是线粒体DNA 的复制形式，其特点是：单向复制，两条链合成不对称，形成一个双链环状分子与一个部分单链环。 D环复制的过程 五、端粒与端粒酶 链状DNA的末端问题：线状DNA，复制完成切去引物后，会产生5’末端缺失。 端粒（telomere）是指真核生物染色体线性DNA分子末端的结构部分，通常膨大成粒状。 线性DNA在复制完成后，其末端由于引物RNA的水解而可能出现缩短。故需要在端粒酶（telomerase）的催化下，进行延长反应。 反转录过程 第三节 DNA的突变 一、基因突变的特征与意义