dd猪精液碱性n-乙酰βd-氨基葡萄糖苷酶的纯化与酶学性质研究.pdfVIP

中国农业科学 2008,41(9):2843-2849 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.09.037 猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的 纯化与酶学性质研究 黄小红，罗忠宝，李明伟，黄一帆 （福建农林大学动物科学学院动物保健研究所，福州 350002 ） 摘要： 【目的】分离纯化猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂，研究其理化性质。【方法】采用硫 酸铵沉淀分级分离、DEAE-32阴离子交换柱层析、Sephadex G-100分子筛柱层析和CM-52阳离子交换柱层析方法， 分离纯化猪精液的N-乙酰- β-D-氨基葡萄糖苷酶；采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯 度鉴定和酶分子量测定；采用聚丙烯酰胺等电聚焦圆盘电泳法测定酶的等电点。【结果】经分离纯化获得比活力 为17 606.15 U·mg-1 、纯化倍数为270.53倍的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂。酶催 化对-硝基苯-N-乙酰- β-D-氨基葡萄糖（pNP-NAG）水解的最适pH为5.5，最适温度为50℃。该酶在pH 3.0～8.9 区域较稳定；在45℃以下处理30 min，酶活力保持稳定。酶分子中亚基的分子量为58.03 kD,等电点为9.42。酶 促反应动力学符合米氏双曲线方程，测得米氏常数 -1 -1 -1 K 为 1.94 mmol·L ，最大反应速度 V 为 27.53 µmol·L ·min 。 m m 酶催化pNP-NAG反应的活化能为88.73 kJ·mol-1 。【结论】本试验选用的分离纯化的方法是可行的。 关键词：猪精液；N-乙酰- β-D-氨基葡萄糖苷酶；分离纯化；酶学特性 Study on Purification and Properties of the Alkaline N-Acetyl-β-D-glucosaminidase from Porcine Semen HUANG Xiao-hong, LUO Zhong-bao, LI Ming-wei, HUANG Yi-fan (Institute of Animal Health, College of Animal Science, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002) Abstract: 【Objective 】The purpose of this experiment was to separate and purify the N-Acetyl-β-D-Glucosaminidase (EC0,NAGase) from the porcine semen. The physicochemical properties of the enzyme were studied. 【Method 】 The NAGase was purified by ammonium sulfate fractionation, chromatography on DEAE-32, Sephadex G-100 and CM-52. The