PCR-DGGE技术及其在发酵食品微生物研究中的应用.pdfVIP

0fAnhui 安徽农业科学。Joumal A面．Sci．2007，35(21)：6591—6593 责任编辑孙红忠责任校对李菲菲 PCR．DGGE技术及其在发酵食品微生物研究中的应用 江芸1一，高峰1，徐幸莲1，周光宏1*(1．南京农业大学农业部农畜产品加工与质量控制重点开放实验室。江苏南京210095；2．南 京师范大学金陵女子学院食品科学系，江苏南京210097) 摘要多聚酶链反应一变性梯度凝胶电泳分析技术(Pc终DGGE)是近年来微生物学研究中应用较广泛的分子技术之一。介绍了DIGGE 的基本原理及其在食品微生物学研究中的应用，着重阐述了PCR-DGGE在发酵食品研究中的应用进展。 关键词 变性梯度凝胶电泳；食品微生物学；发酵食品 中图分类号Q503文献标识码A 文章编号0517—661l(2007)21—06591—03 PL-泉-DGGEandits intheResearch011FermmtedFood Application M妇曲衲10I；icm et andAnimal JlANGYtmal(Key andQuality Laboratoryof蛔枷n|ral P,axiucts№iIlg 210095) niveraity，NanjiJlg，Jian挚u AbstractPCR-DGGEisakindofmolecular in inrecent ofDGGE biologicaltechniqueappliedwidelynficwbiologyyears．Inthe华Iper，theprinciple andits infood reviewed．]heofPCR-DGGEin faxt wm fermentedresearch懈illustrated appficationmicrobiology application outstandingly． Key,mlctls food 3emturing殍抵t耐eletroOloresis(DGGE)；Foodmicrobiology；Fermented 据报道，在自然界中有相当多的微生物(90％～99％)用富含G、c的DNA碱基片段附加到双链的一端以形成一个人 传统方法无法培养出来，且传统微生物技术在对微生物菌群 工高温解链区。这样，DNA片段的原有部分就处于低温解链 进行培养时，不可避免地会造成菌株的富集或衰减，这就人 区从而可实现更好的分离【6-7J。 为改变了原始菌群的微生态构成，对研究结果造成较大偏 该技术的主要操作过程如下：①样品预处理；②样品 差¨。2J。近年来，随着分子生物学的发展，基于DNA指纹技DNA(或RNA)提取及纯化；③16SrDNA或基因片段的PCR 术的分子生物学研究手段越来越多地被引入到微生物学研 究中，其中DGGE因具有可靠性强、重现性高、方便快捷等优品的DGGE分析；⑦图谱分析；⑧条带序列分析。 点而越来越受到重视，是近年来微生物学研究中应用较广泛 2PCR-DGGE技术在食品微生物研究中的应用 的分子技术之一。 (1)分析食品中微生物的多样性。从食品直接提取总 DGGE技术是由Fischer和Lenmn于1979年最先提出的 用于检测DNA突变的一种电泳技术【3|。1993年Muyzer等【4J 可能就代表一个不同的微生物物种，所以DGGE带谱中条带 首次将DGGE技术应用于微生物生态学研究，并证实了这种的数量，即反映出该食品微生物群落中优势类群的数量。 技术在研究自然界微生物群落的遗传多样性和种群差异方 (2)食品中微生物变化的动态监测。DGGE技术可同时 面具有明显的优越性。笔者主要介绍DGGE的基本原理及分析多份样