血管紧张素Ⅱ调节肾脏球旁器颗粒细胞合成肾素的机制研究.pdfVIP

· 28 · 中华 肾脏病杂志 2010年 1月第 26卷第 1期 ChinJNeohro1．Januarv2010．Vo1．26．No · 基 础 研 究 · 血管紧张素 Ⅱ调节肾脏球旁器颗粒 细胞合成肾素的机制研究 陈丽萌 黄宇宁 秦岩 【摘要 】 目的 观察血管紧张素 Ⅱ (AngII)对肾脏球旁器颗粒细胞肾素分泌的调节作 用。 方法 密度梯度离心原代分离小鼠肾小球球旁器颗粒细胞(JGC)。实时定量PCR法检 测JGC内血管紧张素转换酶 (ACE)、Ang1I受体 (AT)1型和 2型 (AT1和AT2)mRNA表达。不 同浓度的AngI／与球旁器细胞共孵育后 ，放射免疫法测定上清中。肾素活性 ；实时定量PCR法 测定细胞 内肾素mRNA表达；化学发光法测定细胞 内、外环磷酸腺苷 (cAMP)水平的剂量和时 间效应。改变细胞内钙离子浓度后，观察JGC内和上清中cAMP浓度改变。实时定量 PCR法检 测AngⅡ对 JGC内腺苷酸环化酶 (AC)5和AC6mRNA表达的影响。 结果 成功分离的JGC 存在 ACE、AT基因表达。AngII可抑制JGC肾素分泌 『(370．6：e36．9)比(299．6+25．7)ngAngI· ml ·h～，P=0．014]，并能抑制基础状态和前列腺素E2、去甲肾上腺素诱导的肾素 mRNA表 达。AngⅡ剂量依赖地降低JGC内和上清中cAMP水平。内质网上的Ca—ATP泵抑制剂毒胡萝 卜内酯和环盐酸吗甲吡嗪酸均能剂量依赖地降低 cAMP水平。细胞内钙离子螯合剂BAPTA—AM 可降低细胞内钙离子浓度 ，进而使细胞 内cAMP水平显著升高 (『11．09+0．48)比(3．55±0．47) nmol／L，P0．01]。AnglI能通过减少42．12％的AC5mRNA表达 ，进而抑制肾素分泌。 结论 AngII直接抑制肾素分泌可能是通过影响AC5，进而抑制cAMP表达来实现的。JGC内调节肾 素分泌过程中，钙离子途径和 Gsd．cAMP两大信号传导途径中存在交联对话。 【关键词】 血管紧张素 Ⅱ； 肾素 ； 肾小球旁器； 腺苷酸环化酶； 环 AMP； 球旁器颗粒细胞 Mechanism ofangiotensin IIinregulation ofreninsynthesisinjuxtaglomerulargranular cells CHEN Li—merig,HUANG Yu—ning,QlN Ynn．DepartmentofNephrology，PekingUnion MedicalCouegeHospital，PUMCandCAMS，Beijing100730，China A【bstract】 Objective Toelucidatethemechanismofangiotensin(Ang)IIinregulation ofrenin synthesis and secretion in primary cultured juxtaglomerulargranularcells (JGCs)． Metbotis MiceJGCswereisolatedand culturedasdescribedbefore．Real—timePCR wasused to demonstratetheexpressionofangiotensinconveningenzyme (CE)andangiotencinreceptor(AT1， AT21i11JGCs．Ang Ⅱ wasCO—culturedwithJGCsstimulated byPGE2 and isoproternolornot． Renin activity in supernatantwasdetected by radioimmunoassay and renin mRNA expression was examinedbyreal—timePCR．DifferentconcentrationsofAng1／were CO—cultured with JGCswith differenttime(1h，4hand24h)，cAMPincelllysateandsupernatantwasmeasuredbyCayman Cyclic AMP EIA Kit．The cytoplasmic ca