WT1基因表达下调对K562-A02细胞阿霉素敏感性的影响.pdfVIP

生堡迪适堂盘查!Q塑堡垒旦篁!Q鲞笠!塑g!也』旦!坐型些：!!些!Q堕，y!!：垫：堕!：鱼 ·373· ·论著· WTl基因表达下调对K562／A02细胞 阿霉素敏感性的影响 杨涛王宏伟徐菁张丽朱镭 【摘要】 目的 探讨wTl基因表达下调对人红向血病耐药细胞系K562／A02阿霉素敏感性的 hair 影响。方法将wTlmRNA的短发夹RNA(shortRNA，shRNA)构建至真核表达载体后转染l(562／ blot法分析wTl基因在转染f前后表 A02细胞，流式细胞术检测转染效率；荧光定量RT．PcR和westem 达的差异；pwTlshRNA转染K562／A02细胞48h并经阿霉素作用后，MTT法检测各组细胞阿霉素，G50 值；流式细胞术检测细胞阿霉素累积量及细胞凋产率。结果与未转染对照组及空载体组相比，转染 h后，其对阿 wTl8hRNA质粒的K562／A02细胞wnmRNA和蛋白水平均明显降低；经阿霉素诱导24 霉素的敏感性明显增高，相对逆转率为71．5％，细胞内阿霉索的累积量较各对照组明最增高(P值均 0．05)，细胞凋亡率明显升高(P0．05)。结论靶向WTlshRNA干扰质粒町有效抑制K562／A02 细胞wTl基凶表达，增强K562／A02细胞对阿霉素的敏感性。 【关键词】 基因，wTl；RNA干扰；细胞系，l562／A02；抗药性，多药 neeaKtsofwTl down ofI(562／A02ceIlsto MM gene regIlIa廿帆佃the辩砸i廿、，ity ad—mycin second T∞。WANGH07喀·wei，XUJ1口曙，zHANcn。zHUki．1nst证me巧Hemn‘okgy，TheHosphnl《sh蝴t 胁d据ⅡZ‰眈昭以’，．Zhi竹m凡030DD』．CAi，m co丌espo以垤口以栅：黝ⅣG舶昭一叫ei，Em以：删Ⅱ昭h嬲@幻￡mn订．cor玮 To thee‰ct8ofwTl down onthe of objective regulationsensitiVjty 【Abstnct】 investigate gene K562／A02cellsto Shorthajr WTl adrimycin(ADM)．MethodsRNA(shRNA)plasmidvectorlargeting cells．1、．ansfectione侬- 胛new“henhanced擘卵ennuorescentprotein(EGFP)wastransfectedintoK562／A02 wasdetectedandtransfectedcellsweresonednow ofWTl wasdetec— ciencv bv cytometeI丫．Expressiongene ted realtimefluorescenceRT—PCRandWestem ADMonK562／A02cellswa8measured by blot．7rhe，C讪of and of cellsweredetected bvMTT鹪sav．IntmcellularADMaccumul“onADM—inducedapoptosisK562／A02 flow 48h