何首乌中大黄素8OβD葡萄糖苷的分离纯化与抗癌活性研究.pdfVIP

何首乌中大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的分离纯化与抗癌活性研究 李登科 李宝赛 崔宝弟 孙震晓* （北京中医药大学中药学院生物制药系，北京100102） 【摘要】背景与目的: 中药何首乌有解毒、消痛等作用，现代研究发现何首乌提取物有一定抗肿瘤 活性，我们前期研究表明，何首乌 R50 组分对正常细胞毒性较小但有一定抗癌作用。本实验主要目 的是分离提取何首乌该组分中的抗癌活性成分并进一步研究其抗癌作用机制。材料与方法: 利用 Sephadex LH-20 、TLC 色谱法、反向硅胶色谱分离系统对何首乌进行分离纯化，并利用 TLC 和 HPLC 进行成分纯度鉴定；MTT 法检测纯化化合物对人肝癌细胞 HepG2 、人正常肝实质细胞L02 、人结直 肠癌细胞HT29 和HCT116 、人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y 和人肺癌细胞A549 的细胞毒作用；Giemsa 染色观察药物作用后 HepG2 细胞和 L02 细胞的形态变化；流式细胞术检测纯化化合物对 HepG2 细 胞和 L02 细胞周期和凋亡的影响。结果 何首乌分离纯化得到纯度为 96 %的大黄素-8-O-β-D-葡萄糖 苷（PMEG ）；PMEG 对 HepG2 细胞、HT29 细胞和 SH-SY5Y 细胞有显著细胞毒性，对其他细胞系 无细胞毒作用，200 µg/mL 剂量下对 L02 和 HepG2 细胞有显著的区别杀伤作用；200 μg/mL PMEG 处理HepG2 细胞细胞出现细胞膜不完整、核碎裂、多核细胞凋亡特征现象，L02 细胞形态正常；PMEG 显著促进 HepG2 细胞的凋亡，且细胞周期也被阻滞在 G2/M 期。结论 PMEG 是何首乌 R50 中具抗 肿瘤作用的主要成分之一，其作用机制与阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡有关，对人正常肝实质细胞 低毒，对肝癌细胞有显著抑制作用。 【关键词 】何首乌；大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷；抗肿瘤；细胞周期；细胞凋亡；区别作用 中图分类号: R285,R975 文献标识码：A Purification and anticancer activity of emodin-8-O-β-D-glucopyranoside in Polygonum multiflorum Thunb [ABSTRACT] BACKGROUND and OBJECTIVE: Polygonum multiflorum Thunb have been used in the treatment of diarrhea and detoxification, modern research discovered P.multiflorum has antitumor activity, our previous studies shown that R50 which was extracted from P.multiflorum have little toxicity to normal cells however show certain anti-cancer effect. Our reseach aimed to explore anti-cancer active ingredients of Polygonum multiflorum Thunb (P.multiflorum) and its mechanism. MATERLAL AND METHODS: Sephadex LH-20, TLC chromatography and reverse silica gel chromatography were employed to separate and purify the P.multiflorum ; the purity was evaluated by HPLC ；cell viability was detected by MTT assay after cells treated with PMEG at different concentration and time; the morphological changes in c