高质量毕赤酵母基因组DNA提取方法比较.pdfVIP

生物技 术通报 - 研 究 报 告 · BIOTECHNOL0GY BULLETlN 2010年第 1期 高质量毕赤酵母基因组 DNA提取方法比较 唐天乐 高炳淼 长孙东亭 罗素兰 (海南大学海洋学院 热带生物资源教育部重点实验室 海南大学生物技术实验中心 ，海 口570228) 摘 要 ： 旨在 比较5种毕赤酵母基 因组 DNA的提取法，以便获得简便高效的提取高质量酵母基 因组 DNA的优化方法。 分别使用蜗牛酶破壁法 ，超声波破碎法，液氮研磨法，Lyticase破壁法，试剂盒法提取毕赤酵母基 因组 DNA，然后进行 DNA 电 泳检测以及紫外分光光度计测定DNA浓度和纯度 。结果显示 ，5种方法均能提取 出酵母基因组DNA，而酶法所提取的酵母基 因组DNA质量最好。由此证实，蜗牛酶法成本低、效果好 ，是理想的提取高质量酵母基 因组 DNA的方法，完全满足后续试验 要求。 关键词 ： 毕赤酵母 高质量基 因组 DNA 提取方法优化 ComparisonofMethodsforHighQualityGenomicDNA Extraction ofPichiapastoris TangTianle GaoBingmiao ZhangsunDongting LuoSulan (KeyLaboratoryofTropicalBiologicalResourcesofMinistryofEducation， OceanCollege，CenterforExperimentalBoitechnology，HainanUniversity，Haikou570228) Abstract： Inordertofindanoptimizedandeffectivemethod，therewerefivemethodsofyeastgenomicDNA extractiontobe compared，including snailase，ultrasonicextraction，liquidnitrogenattrition，lyticaseandyeastDNA kitmethods．ThegenomicDNA qualitywasexaminedbyelectrophoresisandultravioletspectrophot0meteL Resultsdemonstrated thatgenomicDNA ofPichiapastoris couldbeisolatedbyallthefivemethods，inwhichsnailasemethodwasthebestonetogethighqualityDNA．Therefore，thesnailase methodshowedmanyadvantagessuchasrelativelylow expenseandhighefficiencyovertherest． Keywords： Pichiapastoris HighqualitygenomicDNA Extractionmethodoptimization 毕赤酵母 (Pichiapastoris)是 目前应用最广泛 正确插入 的先决条件 。但 因为酵母是真核细胞 的外源蛋 白表达 系统之一 ，该表达 系统 易于操作 拥有细胞壁 ，难 以破坏 ，所 以提取酵母 基因组 DNA 培养 、快速生长、表达量高 ，同时又能对外源真核 比提取大肠杆菌 DNA要困难得多。一般来说，制备 基因进行正确翻译和翻译后加工与修饰 ，并能对 酵母基因组 DNA模板进行 PCR 等常规方法所要 许多蛋 白质产物进行分泌表达 ，使产物易于提纯 。 求的基因组 DNA质量要求不高 ，但会出现假阳性的 近年来该表达 系统极受研究者的青 睐，已用该 系 现象 ，而进行 Southern杂交等试验 ，需要至少 (10 统成功表达 了500多种来 自病毒