《饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法》标准征求意见稿.docVIP

ICS?点击此处添加ICS号 点击此处添加中国标准文献分类号 备案号： DB15 内蒙古自治区地方标准 DB 15/ T—XXXX 饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2 的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法 ???Determination of aflatoxins B1 , B2 , G1 , G2 in feed—Cleanup by immunoaffinity chromatogaphy and determination by high-performance liquid chromatigraphy?? XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 内蒙古自治区质量技术监督局 发布 前????言 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由内蒙古自治区质量技术监督局提出并归口。 本标准起草单位：内蒙古赤峰出入境检验检疫局。 附录A为资料性附录。 本标准主要起草人：姜兆兴、王智亮、李智瑾、曹旭、赵瑞霞、任立新、赵敏、张鹏翔、杨春燕、刘振伟。 饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法 范围 本标准规定了免疫亲和层析净化高效液相色谱法测定饲料中黄曲霉毒素的条件和详细分析步骤。 本标准适合于饲料中配合、浓缩饲料和单一饲料中黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2含量的测定。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 方法原理 试样经过甲醇-水提取，通过含有黄曲霉毒素特异性抗体的免疫亲和层析柱净化，用水将免疫亲和柱上杂质除去，以甲醇洗脱，洗脱液通过带荧光检测器的高效液相色谱仪柱后碘溶液衍生测定，外标法定量。 试剂和材料 除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯，水符合GB/T 6682中一级水的规定。 4.1 甲醇（CH3OH）：色谱纯。 4.2 甲醇-水（7+3）：取70 mL甲醇加30 mL水。 4.3 甲醇-水（45+55）：取45 mL甲醇加55 mL水。 4.4 苯：色谱纯。 4.5 乙腈：色谱纯。 4.6 苯-乙腈：（98+2）：取2 mL乙腈加98 mL苯。 4.7 氯化钠（NaCl)。 4.8 黄曲霉毒素标准品（黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2）：纯度≥97.0％。 4.9 黄曲霉毒素标准储备溶液：分别精密称取黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准品各10 mg至棕色容量瓶中，先加入2 mL乙腈溶解后，再用苯稀释至100 mL，配制成100 μg/ mL的标准储备液，避光，置-20℃保存备用，保存期3个月。 警告：由于霉菌毒素毒性很强，试验人员应注意自我保护。操作时，应避免吸入、接触霉菌毒素标准溶液。配置溶液应在通风橱内进行，工作时应注意戴眼镜、穿工作服、戴医用乳胶手套。凡接触霉菌毒素的容器，需浸入1%次氯酸钠溶液，过夜后清洗。同时，为降低接触霉菌毒素的机会，本标准鼓励直接购买并使用霉菌毒素的有证标准储备液。 4.10 黄曲霉毒素混合标准工作液：分别吸取一定量的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准储备液，置于棕色容量瓶中，用苯-乙腈（4.6）溶液稀释成浓度为1.00 μg/mL黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2混合标准工作液，保存于4℃冰箱中，保存期1个月。 4.11 混合标准系列工作溶液：分别吸取一定量的混合标准储备液（4.10），用苯-乙腈（4.6）稀释成浓度为1.0 μg/L～100.0 μg/L的混合标准系列工作溶液，临用新配。 4.12 柱后衍生溶液（0.05％碘溶液）：称取0.1 g碘，溶解于20 mL甲醇后，加纯水定容至200 mL，以0.45 μm的尼龙膜过滤，4℃避光保存。 4.13 黄曲霉毒素免疫亲和柱：Beacon黄曲霉毒素免疫亲和柱，或效果相当者。 4.14针式尼龙滤膜：0.45μm。 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：具有360 nm激发波长和450 nm发射波长的荧光检测器。 5.2 黄曲霉毒素柱后衍生系统。 5.3 分析天平：0.01 g。 5.4 玻璃纤维滤纸：直径11 cm，孔径1.5 μm。 5.5 玻璃注射器：10 mL，20 mL。 5.6 玻璃试管：直径12 mm，长75 mm，无荧光特性。 5.7 高速匀质器：18 000 r/min～22 000 r/min。 5.8 超声波清洗器。 5.9 空气压力泵。 5.10 微量注射