转基因马铃薯中纯化人白介素-12的生物学活性分析.pdfVIP

安徽农业科学。JournalofAnhuiA ．Sci．2010，38(3)：1173—1176 责任编辑 常俊香 责任校对 卢瑶 转基 因马铃薯 中纯化人 白介素．12的生物学活性分析 罗果 ，黄进 ，葛正龙 (1．遵义医学院中心实验室，贵州遵义563oo3；2．遵义医学院珠海校区生物工程系，广东珠海5l9o41；3．遵 义医学院生物化学教研室，贵州遵义 563003) 摘要 分析了转基因马铃薯中纯化人白介素一l2(hlL一12)的生物学活性。结果表明，hIL一12纯化品在体外能刺激植物凝集素 (PHA)活 化的外周血单个核细胞(PBMC)增殖；hIL一12纯化品对人肝癌细胞 HepG2．2．15的生长具有抑制作用，且其抑制效果随hIL一12浓度的升 高而增强；hIL一12纯化品在体外对乙肝病毒 DNA的复制和表面抗原、e抗原的分泌产生抑制作用。 关键词 转基因马铃薯；人白介素一12；生物活性 中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2010)03一Ol173—04 Analysison BioactivityofHunlanInterleukin12Purified from TransgenicPotato LUo Guoetal (CentralLaboratory，ZunyiMedicalCollege，Zunyi，Guizhou563003) Abstract Thebioactivityofhuman interleukinl2purifiedrfom transgenicpotatowasanalyzed．TheresultsshowedthatthepurifiedhlL一12 hadpromotiononproliferationofPBMC activatedbyPHA invitro．andithadinhibitionongrowth ofHepG2．2．15．anditsinhibitioneffect wasenhancedwiththeincreasingofitsconcn．AnditalsohadinhibitiononreplicationofHBV DNAandsecretionofHBsAgandHBeAgin vitro． Keywords Transgenicpotato：Hunlan interleukinl2：Bioactivity 人白介素．12(humaninterleukin12，hlL一12)是主要由树 1．3 方法 突状细胞 、巨噬细胞 、B淋巴细胞以及抗原提呈细胞 (APC) 1．3．1 人外周血单个核细胞(PBMC)的分离。取健康人外 产生的异二聚体细胞 因子。它具有广泛 的生物学活性，是 周血 ，无菌条件下采用 Ficoll一密度梯度离心法分离出PBMC， 连接天然免疫和获得性免疫的功能性桥梁，在机体抗肿瘤 、 用含 10％FBS的RPMI一1640培养液将细胞配制成细胞悬液， 抗病毒等过程中发挥着极其重要的作用 。 并用台盼蓝检查细胞活力。 hIL一12具有广泛的生物学活性和潜在的医疗应用前景 ， 1．3．2 hlL．12对PHA-P活化的PBMC的作用。取 PBMC悬 是一个值得开发的细胞因子。目前，hlL一12主要来源于血液 液，以RPMI一1640调整细胞浓度为 1x10。／ml，加入 PHA．P 制品和基因工程产品。由于血液来源有限，且容易受到污 (终浓度为 10 m1)，每孔 100 l接种于 96孔细胞培养 染 ，所以利用基 因工程生产 hIL一12是获得 hlL-12的主要途 板，置于37oC、5％CO 培养箱中培养72h。 径。笔者以马铃薯为生物反应器生产 hIL一12，成功构建 了 将活化的PBMC分为hIL一12纯化 品组 、rhIL一12标准品 hlL．12转基因马铃薯表达载体 ，并对该表达体系进行了鉴 组和空白对照组 ，样品和标准品的终浓度分别为25、50、100、 定 ，对其表达的 hIL一12进行了分离纯化 ，并对纯化hIL一12 200、4OOpg／ml，每个浓度设6个平行孔。置于CO，培养箱中 的生物学活性进行了检测。