Prosaposin基因哺乳动物细胞表达质粒的构建及稳定转染细胞系的建立.pdfVIP

实用癌症杂志2010年 1月第 25 · 13 · Prosaposin基因哺乳动物细胞表达质粒的构建及稳定 转染细胞系的建立 郭 芬 李月琴 李实骞 罗志文 张 欣 周天鸿 【摘要】 目的 构建前凋亡因子prosaposin的哺乳动物细胞表达质粒，转染NIH3T3细胞，建立稳定转染prosaposin 的细胞系。方法 采用 PCR方法扩增prosaposin的开放 阅读框 ，酶切后 的 PCR扩增产物和退火后的人工合成 的 c—Myc 抗原表位标签，共同克隆至pcDNA3．1(+)哺乳动物细胞表达载体中，构建pcDNA—Psap—Myc融合表达质粒。用脂质体 将经过验证、测序的pcDNA—Psap—Myc质粒转染NIH31、3细胞，通过G418筛选建立稳定过表达prosaposin的NIH333细胞 系。采用RT．PCR和 w