四种改良CTAB法提取大叶朴基因组DNA比较研究.pdfVIP

北方 园艺20lo(1)：]65～168 ·生物技术 · 四种改良CTAB法提取大叶朴基因组DNA比较研究 赵 静，叶 欢，李 雪 松，李 建 华 (孝感学院 生命科学技术学院，湖北 孝感 432003) 摘 要 ：以大叶朴成熟叶片为试材 ，采用 4种改 良(： 出 法提取大叶朴基 因组 DNA，并比较 其提取效果。结果表 明：用这 4种方法均可获得没有发生褐变、完整性好的DNA。其中方法 2 (用了低浓度 乙醇和高盐去 多糖)和方法 4(用了低浓度 乙醇去多糖)去多糖的效果更好一些 ，但获 得的DNA浓度较低；ISSR扩增结果表明，4种方法提取的DNA均可用于ISSR扩增，但方法2和 3扩增 的效果稍好一些 。 关键词 ：大叶朴 ；改 良C]AB法 ；基 因组 DNA；多糖 ；褐变 中图分类号 ：S687．03．6 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001--0009(2010)01--0165--04 得到高质量的I)NA是分子生物学研究巾关键 的第 叶朴成熟叶片采集于孝感市槐荫公园，采集后立即 一 步。从植物材料中提取基 组DNA 的质量受到多种 放入冷冻袋 ，带回实验室，用 ddH ()清洗 ，用滤纸吸干 因素的影响。在不同植物或同种植物不同时期组织中 表面残留水分 ，标记分装，置--60C冰箱冷冻保存备用。 存在着不同数量的多糖、色素 以及种类繁多的次生物 1．2 主要仪器和提取试剂 质，特别是多糖、酚类在提取过程 中可与 DNA共沉淀 ， 冷冻离心机 (Eppendorf)，DW-MI型超低温冷冻储 形成包裹DNA的黏稠胶状物，难 以溶解或产生褐变，使 存箱 (中科美麦低温科技有限公司)，DYY一7C型电泳仪 得 DNA提取质量较低 ，获得 的DNA溶液常常黏度大乃 (北京六一仪器厂)，DYY-II1型水平 电泳槽 (-II~京六一仪 至呈胶状 ，这些 物质如果清 除不净则会影 响后续研 器厂)，752N型紫外可见分光光度计 (上海精密科学仪器 究n 。如何高效简便地去除多糖 、多酚等次生物质，对 有 限公司)，FR-200A全 自动紫外与可见分析系统 (上海 提取纯化植物DNA来说至关重要l3j。 复 日科技有限公司)，PCR仪 (PTC一100thermocycler)。 大~f}b(CeltiskoraiersisNakai)属榆科，原产我国华 聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)，C]AB—free缓 冲液 (0．2otol／I 北及辽宁等地，它是典型的遮荫兼观叶树种，同时，大叶 Tris—HC1，50mmoi／LEDTA，0．25mol／INaC1)，7-巯基 朴树皮纤维可代麻，也可用作造纸或人造棉的原料，果 乙醇，2×CTAB 提 取 缓 冲液 (2 CTAB，0．1mol／L 可榨油，供制肥皂和作润滑剂用。大I11朴成熟 叶片较 Wris—HC1，20 reotol／L EDTA，1．4mol／I NaC1，1 硬，叶色浓绿，富含多糖 、色素和多酚等次生物质，使得 PVP)，氯仿 ／异戊醇 (24：1)，10×CTAB(10 CTAB， 高质量总DNA 的提取较为困难 ，因此，根据适当浓度的 0．7mol／LNaC1)，无水 乙醇，饱 和酚，7．5mol／L的醋 无水乙醇可使多糖沉淀，多糖在高盐溶液 中的溶解度 酸铵 。 大，PVP可有效去除多酚等原理，以经典提取植物DNA 1．3 试验方法 的C 出法为基础l4]，设计 了4种改 良Cr1、AR法提取大 1．3．1 方法 1 称取约 6g的叶片，沿叶脉撕碎后加入 叶朴成熟叶片基因组 DNA，并用琼脂糖电泳、紫外分光 到有少量石英砂和 PVP的研钵 中在冰上研磨至匀浆